转化与筛选 -

转化（Transformation）是在 1928 年由格里菲思在对 菌进行研究时发现的。转导（Transduction）是 1952 年由莱德伯格在研究 菌的遗传重组时发现的。

重组 DNA 导入宿主的一般方法有 ， ， ， 和 等。

称为感受态细胞（Competent cell）。

有关感受态出现的机制，目前主要有两种假说： 和 。

.外源 DNA 可以通过转化（transformation）的方法导入到宿主菌中，transformation 是

指 的过程。常用的 transformation 的方法有 ， 和 。

转染（Transfection）是指 的过程；感染（Infection）是指 。

细菌结合（Conjugation）是指 的过程。

转导（Transduction）是指 ，它可分为两种： 和 。

重组体的筛选有两层含义：① ；② 。

目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。大致可以分为：① ；② ；

③ ；④ 等。

噬菌斑形成选择法有两种判断标准：① ；② 。

PCR 扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于 。

核酸杂交探针可分为两大类：DNA 探针和RNA 探针。其中DNA 探针又分为 探针和 探针。.

如果用限制性核酸内切酶切割双链DNA 产生5’突出的黏性末端，则可以用 的方法进行3’端标记。如果用限制性核酸内切酶切割双链DNA 产生的是3’突出的黏性末端，则可以用 进行3’端标记。

根据Northern 印迹的结果可以说明： 。

RNA 分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜 (尼龙膜) 上，同一放射DNA 探针杂交的技术称 。

在 技术中，DNA 限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜 (或尼龙膜)上，然后与放射性的DNA 探针杂交。

为了鉴定某一具有特殊功能蛋白质的结构，可以用一个容易检测的报告蛋白制备 ，然后跟踪报告蛋白在细胞中的行为即可。

可用T4 DNA 聚合酶进行平末端的DNA 标记，因为这种酶具有 和 的活性。

硝酸纤维素膜(NC)结合DNA 的能力为 ，尼龙膜(Nylon)为 。

如果对一个克隆的基因进行遗传操作，使互补的链转录，会产生同正常的RNA 转录物互补的 分子。 在Southern 印迹中，DNA 转移的速度取决于 和 。

用不对称PCR 合成单链DNA 探针时，两个引物的浓度比为 。

点杂交的主要缺点是 。

根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必须考虑三种因素：① ；② ；③ 。

Northern 印迹和Southern 印迹有两点根本的区别：① ；② 。

放射免疫筛选的原理基于以下三点：① ；② ；③ 。

能够与特定DNA 序列结合的放射性DNA 片段称为 。

技术是基于互补的DNA 单链分子能够形成稳定双螺旋结构的天然特性而发展起来的。

下面关于用T4 多核苷酸激酶标记5’端制备探针的描述中 ( )是不正确的。

A．既能标记DNA，又能标记RNA B．既能标记双链DNA 又能

标记单链DNA

C．只能标记突出的5’端不能标记其他类型末端 D．DNA 或RNA 必须有5'-OH 的存在

报告基因 ( )。

A．以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列 B．以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区

C．能用于检测启动子的活性 D．能用于确定启动子何时何处有活性

在利用Lac Z 失活的显色反应筛选法中，IPTG 的作用是 ( )。

A．诱导宿主的α肽的合成 B．诱导宿主的ω肽的合成

C．作为酶的作用底物 D．作为显色反应的指示剂

用菌落杂交法筛选重组体时，( )。

A．需要外源基因的表达 B．不需要外源基因的表达

C．要根据克隆基因同探针的同源性 D．上述说法都正确

切口移位是指在 ( ) 的作用下，使 ( ) 带上放射性标记。

A．DNA 聚合酶I，RNA B．DNA 聚合酶I，DNA C．DNA 聚合酶III，RNA D．DNA 聚合酶III，DNA D．染色体未同蛋白质分开而沉淀

用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的 ( )。

A．DNA B．RNA C．抗体 D．抗原

Southern 印迹是用DNA 探针检测DNA 片段，而Northern 印迹则是 ( )。 A．用RNA 探针检测DNA 片段 B．用RNA 探针检测RNA 片段

C．用DNA 探针检测RNA 片段 D．用DNA 探针检测蛋白质片段

用免疫化学法筛选重组体的原理是 ( )。

A．根据外源基因的表达 B．根据载体基因的表达 C．根据mRNA 同DNA 的杂交 D．根据DNA 同DNA 的杂交

随机引物标记探针，下列各项中哪一项是不正确的? ( )

A. 双链DNA、单链DNA、RNA 都是可以标记的 B．不需要用DNase I 预处理 C．反应时可用Klenow 酶 D. 反应时可用DNA 酶I

在切口移位标记DNA 探针时只能使用 ( )。

A．Klenow 酶 C．DNA 聚合酶II

要对一双链的DNA 分子进行3’端标记，可用( )。

A．Klenow 酶 C．T4 DNA 聚合酶

关于噬菌斑筛选法的原理，下面哪一种说法不正确? ( A．噬菌斑颜色变化 的变化

C．对IPTG 的分解能力

下列筛选重组体的方法中，不属于遗传学的方法是：( A．插入失活法 C．噬菌斑选择法

B．DNA 聚合酶I D．DNA 聚合酶III B．DNA 聚合酶I D. T7 DNA 聚合酶 )

B．cI 基因失活造成的噬菌斑D．对X-gal 的分解与否 )。

B．显色反应选择法 D．R 环分析法

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