毕业设计正文（改完版）-李云浩(1) - 图文(5)

湖北理工学院 毕业设计（论文）

目录

1 问题的提出 .......................................................................................................................... 1

1.1 研究的背景 .......................................................................................................................... 1 1.2 研究的目的和意义 ............................................................................................................... 1

2 文献综述 ................................................................................................................................ 2

2.1 地木耳的研究进展 ............................................................................................................... 2 2.1.1地木耳的性状.................................................................................................................... 2 2.1.2 地木耳的营养成分 ........................................................................................................... 2 2.1.2.1 蛋白类 .......................................................................................................................... 2 2.1.2.2 脂类 .............................................................................................................................. 3 2.1.2.3 氨基酸类....................................................................................................................... 3 2.1.2.4 多糖类 .......................................................................................................................... 3 2.1.2.5 维生素类....................................................................................................................... 4 2.1.2.6 矿物质类....................................................................................................................... 4 2.1.2.7 色素类 .......................................................................................................................... 4

2.1.3 医药领域 .......................................................................................................................... 5 2.1.3.1 地木耳在医药中的功效 ............................................................................................... 5 2.1.3.2 地木耳的药理作用研究进展 ....................................................................................... 6 2.1.4 食品领域 .......................................................................................................................... 7 2.1.5 保护环境 .......................................................................................................................... 8 2.1.6 农林牧业 .......................................................................................................................... 8

2.2肿瘤侵袭机制........................................................................................................................ 8 2.2.1 肿瘤 .................................................................................................................................. 9

2.3天然抗肿瘤活性物质研究现状 .......................................................................................... 10 2.4 划痕实验 ............................................................................................................................ 11

3 研究方法 .............................................................................................................................. 13

3.1 材料与仪器 ........................................................................................................................ 13 3.1.1 材料 ................................................................................................................................ 13 3.1.2 仪器 ................................................................................................................................ 13

3.2 地木耳多糖的提取 ............................................................................................................. 13 3.2.1 绘制标准曲线................................................................................................................. 13 3.2.2 地木耳的提取................................................................................................................. 14 3.2.3 Sevage试剂除蛋白纯化及浓缩 .................................................................................... 14 3.2.4 地木耳多糖提取率及其含量的测定 ............................................................................. 14

3.3 多糖溶液的配制................................................................................................................. 14 3.4 HeLa细胞分板培养及划痕实验 ........................................................................................ 14 3.4.1 试剂及设备..................................................................................................................... 14 3.4.2 细胞培养 ........................................................................................................................ 15

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3.4.3 地木耳多糖抑制Hela细胞侵袭活性检测 ................................................................... 22 3.5 实验结果 ................................................................................................................................. 23 3.5.1地木耳多糖含量测定 ...................................................................................................... 23 3.5.2 抑制Hela细胞侵袭活性检测 ....................................................................................... 24

4 结论和建议 ........................................................................................................................ 27 参考文献 .................................................................................................................................... 28 致 谢 ............................................................................................................................................. 29

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1 问题的提出

1.1 研究的背景

肿瘤侵袭扩散是恶性肿瘤的主要特征之一。具有浸润性生长的恶性肿瘤，不仅能在原发部位迅速生长，然后直接蔓延。而且肿瘤还可以通过侵袭等各种途径扩散到身体其他部位（转移），从而导致无法彻底的根治。肿瘤的侵袭扩散能力是肿瘤无法彻底根治的关键。

目前国内和国外对地木耳（Nostoc commune）的化学成分、生物活性和开发利用等研究正处于开始阶段, 对地木耳营养成分进行了一些初步的研究,但是研究结果差别相对较大，不宜采用;对地木耳的化学成分并未进行系统研究,其活性成分的构成及生物活性还有待深入研究;有关化学成分的纯化分离、结构的分析鉴定、活性检测等研究同样不够;针对地木耳功能食品、药品和环保产品的研究开发不够,其资源的综合利用有待进一步发现和探索。

1.2 研究的目的和意义

本课题“地木耳多糖抑制人宫颈癌侵袭能力实验研究”是研究Nostoc commune当中的多糖成分可能具有抑制宫颈癌侵袭的能力，对阻止癌细胞侵犯临近组织和细胞进而转移扩散全身具有重要的意义。原材料地木耳产地遍布多省，资源丰富，容易采集获得。而近些年来，有很多关于多种植物、真菌多糖抗肿瘤领域的研究。本课题研究地木耳多糖抑制人宫颈癌细胞侵袭能力，为抗癌药品的研发和推广、临床及应用提供新的思路。

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2 文献综述

2．1 地木耳的研究进展

2.1.1地木耳的性状

别名：天仙米、地皮菜、地耳等，为念珠藻科植物葛仙米的藻体，是真菌和藻类的结合体。多生于潮湿的地面、墙根以及静水面，夏季雨后湿地表面上最为常见，各省各地均有分布。此外，其富含蛋白质、多种维生素和磷、锌、钙等矿物质，可食用，亦作药用。

繁殖方式主要是异形胞将藻丝隔成若干个小段，叫藻殖段，极易从异形胞处断开分离，每个藻殖段再通过细胞分裂生长成长的丝状体。地木耳的这种以藻殖段进行繁殖的方式，也属于营养繁殖的一种增殖方式。地木耳（Nostoc commune）可固氮，也可食用。 地木耳由真菌和藻类结合而成的结合体，一般生长在光线稀少的阴暗潮湿地方，暗黑色，有点像泡软的黑木耳，藻体比黑木耳薄。多生于潮湿阴暗的土壤表面和静水当中，夏季雨后湿地面上最常见，而且各地均有分布。中国清代王磐编纂的《野菜谱》中，收录了滑浩一首名为《地踏菜》的词曰：“地踏菜，生雨中，晴日一照郊原空。庄前阿婆呼阿翁，相携儿女去匆匆。须臾采得青满笼，还家饱食忘岁凶。”这首歌谣记述了生长出的地木耳充饥救荒的情景。由此可见，地耳从古至今，就是饥荒年头重要渡荒的天然野生藻类，拯救过千万的劳苦大众，是大自然恩赐的佳品，它为广博大地上的人们立下了不可磨灭的功绩。 2.1.2 地木耳的营养成分 2.1.2.1 蛋白类

国内关于此类的文献也指出,地木耳（Nostoc commune）中蛋白质含量一般占干重的14.6%-21.81%,Maria Portia P.Briones等研究报道,地木耳中的蛋白质含量占干重的22.8%-28.7%,蛋白质的含量和地木耳的生长环境地域有关,并且发现地木耳（Nostoc commune）中含有可消化性很高的蛋白质,是多肽类物质的储存和来源。一些研究发现一种血红蛋白存在于Nostoc commune当中,取名cyanoglobin。这种血红蛋白结合氧分子的方式是可以逆转的, 它有较为厉害地和氧亲和力,但同时氧化的速度和X因子损失的速度也很快。Donna R.Hill等发现这种血红蛋白属于一种胞外蛋白。在经过了休眠多年的荒漠藻中Breanne Shirkey等得到活性强的含铁超氧化物歧化酶(SODF),这些SODF可以清除细胞外的超氧自由基，而这种自由基由多糖在UV照射下生成的。可以测定出了SODF的氨基酸的排列方式,并且减少紫外线间接

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损伤细胞。此外其他文献指出，地木耳还含有肌红蛋白等人体需要的蛋白质。 2.1.2.2 脂类

Nostoc commune是低脂肪藻类食品, 粗脂肪含量大约在0.2%-4.28%左右,因此可以作为低脂肪保健品。Patti Ann Ta-ran to等研究发现地木耳中含有一定数量的含硫黄糖脂质、半乳糖甘油二脂以及双半乳糖基甘油二脂、磷脂和磷脂酰甘油、和单葡萄糖基甘油二脂。研究表明地木耳中可以提取出一种新的脂肽,其分子式为 C48H76O18N10,一个异常的氨基酸和一个含有羟基、氨基的硬脂酸在此结构中,此结构的硬脂酸和氨基酸具有一定的抗真菌活性。再次研究发现表明，水的重吸收可以加快生物合成地木耳中脂质等脂类。 2.1.2.3 氨基酸类

地木耳（Nostoc commune）含有18种氨基酸,其中人体必需的8种氨基酸含量更为丰富,相互间的成分含量比例与人类个体需要量十分接近。总氨基酸含量也高于猴头、木耳等中氨基酸的含量,与发菜、香菇中氨基酸的含量相近。Rajeshwar P. Sinha等发现地木耳中含有霉孢菌素样氨基酸(MAA),利用高效液相色谱研究发现,这种物质包含丝氨酸组和甘氨酸组,在334nm处有一个最大吸收峰值,其保留时间大约是2.8分钟。 2.1.2.4 多糖类

地木耳（Nostoc commune）的总糖含量是0.53%-23.8%,钱信忠等科学家研究报道地木耳含有单糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖等多糖包括海藻糖、蔗糖、木糖、鼠李糖、果胶多糖类、葡萄糖苷等以及细胞胞外多糖等多种糖类。用蒽酮比色法粗略估算地木耳中可提取的海藻糖的含量大约为0.24mg/g( 鲜重)。运用色谱法薄层层析分析方法研究发现地木耳中含有大量的海藻糖,盛家荣等对地木耳多糖（Nostoc polysaccharide）进行了研究,粗提取出来的多糖经过QAE-Sephadex-A-25层析得到几种水溶性多糖分别是，SP-1,SP-2,SP-3。又通过一种特殊的薄膜电泳方法进行Sephadex-100的层析,发现当中的均一多糖是SP-2,用高效液相色谱测定SP-2的相对分子质量为8.8×104,通过GC测定表明它是由单糖葡萄糖为单元组成,红外光谱显示SP-2为B-D-吡喃糖苷键构成,并且对其活性进行测试,结果测试证明地木耳多糖能促进一些植物种子的发芽速度。

有关文献报道，研究验证了多糖提取的最佳工艺条件,即提取温度98℃、提取时间3.8h,提取次数在3-5次，在此条件下水提水溶性多糖的最大提取率为 7. 91%;

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