细胞模型建立的指导原则和标准操作规范第一版 - 图文(2)

于能耐高温的物品，如金属 器械、玻璃、搪瓷、敷料、橡胶及一些药物的灭菌。灭菌条件要求：蒸气压力205.8kPa（2.1kg/cm2），温度达132℃以上并维持10分钟，即可杀死包括具有顽强抵抗力的细菌芽胞在内的一切微生物。 高压蒸汽要求：

①包裹不应过大、过紧，一般应小于30cm×30cm×50cm；②高压锅内的包裹之间不要排得太紧密，以免妨碍蒸气透入，影响灭菌效果；③压力、温度和时间达到要求时,指示带上和化学指示剂即应出现已灭菌的色泽或状态；④易燃，易爆物品，如碘仿，苯类等，禁用高压蒸气灭菌；⑤锐性器械，如刀、剪不宜用此法反复灭菌，以免变钝；⑥瓶装液体灭菌时，要用玻璃纸和纱布包扎瓶口；如有橡 皮塞时，应插入针头排气；⑦应有专人负责，每次灭菌前，应检查安全阀的性能，以防压力过高发生爆炸，保证安全使用；⑧注明灭菌日期和物品保存时限，一般可保存l～2周。高压蒸汽的物品含有一定的水分和蒸汽，因此需要在 一定温度下进行烤干。我们将高压灭菌后的物品放入干烤 箱中烤干，温度50℃～80℃5h。 2.干烤消毒：

该法利用热辐射和灭菌器内空气的对流来传递热量而使细菌的繁殖体因体内脱水而停止活动的一种方法。由于干热空气的穿透力弱且不均匀、比热小、导热性差，故需时间长、温度高，才能达到灭菌目的。一般需 135-145℃ /3-5 小时、 160-170℃ /2-4 小时、 180-200℃ /0.5-1 小时；热原经 250℃ /30 分钟或 200℃ /45分钟，可破坏。 本法适用于耐高温的玻璃、金属等用具，以及不允许湿气穿透的油脂

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类和耐高温的粉末化学药品如油、蜡及滑石粉等，但不适用橡胶、塑料及大部分药品。如安瓿、输液瓶、西林瓶及注射用油宜用干热空气灭菌法灭菌。 3.紫外线消毒 杀毒机制

紫外线主要是通过对微生物(细菌、病毒、芽孢等病原体) 的辐射损伤和破坏核酸的功能杀死微生物的，从而达到消毒的目的。紫外线对核酸的作用可导致键和链的断裂、股间交联和形成光化产物等，从而改变了DNA的生物活性，使微生物自身不能复制，而产生致死性损伤。 要求用于消毒的紫外线灯在电压为220V、环境相对湿度为60%、温度为20℃时，253.7nm紫外线辐射强度不得低于7ouW/cm2(普通30W 直管紫外线灯在距灯管1米处测定) 。 使用方法

杀灭一般细菌繁殖体时，应使照射剂量达到10000 uW.s/CM2；杀灭细菌芽胞时应达到100000 uW.s/CM2；病毒对紫外线的抵抗力介于细菌繁殖体和芽胞之间；真菌孢子的抵抗力比细菌芽胞更强，有时需要照射应达到600000 uW.s/CM2；在消毒的目标微生物不详时，照射剂量不应低于100000 uW.s/CM2。

辐照剂量是所用紫外线灯在照射物品表面处的辐照强度和照射时间的乘积。因此，根据紫外线光源的辐照强度，可以计算出需要照射的时间。例如，用辐照强度为70 uW/CM2的紫外线表面消毒器近距离照射物品表面；选择的辐照剂量是100000 uW.s/CM2；

则需照射的时间是： 100000 uW.s/CM2 ÷70 uW/CM2=24分钟。

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对室内空气的消毒

(1)间接照射法：首选高强度紫外线空气消毒器，不仅消毒效果可靠，而且可在室内有人活动时使用，一般消毒30min即可达到消毒合格 (2)直接照射法：在室内无人条件下，可采取紫外线灯悬吊式或移动式直接照射。 采用室内悬吊式紫外线消毒时，室内安装紫外线消毒灯(30W紫外线灯，在1.0米处的强度>70 uW/cm2)的数量为平均每立方米不少于1.5W照射时间不少于30min。 注意事项

(1)在使用过程中，应保持紫外线灯表面的清洁，一般每两周用酒精棉球擦拭一次，发现灯管表面有灰尘、油污时，应随时擦拭。 (2)用紫外线灯消毒室内空气时。房间内应保持清洁于燥，减少尘埃和水雾，温度低于20℃或高于40℃，相对湿℃大于60%时应适当延长照射时间。

(3)用紫外线消毒物品表面时，应使照射表面受到紫外线的直接照射，且应达到足够的照射剂量。

(4)不得使紫外线光源照射到人，以免引起损伤。 (5)紫外线强度计至少一年标定一次。 4.滤过除菌

用于培养用液和各种不能高压灭菌的溶液的除菌。采用金属滤器和小型的塑料滤器，配上可以更换的微孔滤膜，极大地方便了操作。滤器型号按直径大小划分。如过滤量大的培养用液常用较大型号的金属滤器(直径90 mm、100 mm、142 mm??等)，配以过滤泵使用。过滤量较小的液体常用注射器推动的塑料小滤器(直径20 mm、25 mm等)。滤膜

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孔径有0．60 μm、0.45 μm、0.35μm、0.22μm、0.1μm等，以0.22 μm除菌最为保险，但对于较粘稠难滤过的液体，仍需选用孔径较大的滤膜。

①在过滤器上装上微孔滤膜，孔径为0.22μm。 ②用布包好，湿热灭菌后使用。 5．化学消毒法(配制方法见附件10) 常用的消毒液有如下几种：

(1)70％(或75％)酒精：超净台里常备70％酒精 (卫生级酒精)和纱布，用于手和一些金属器械、电动移液器或工作台面的消毒。

(2) 0.1％新洁尔灭：主要用于手和前臂的清洗以及工作后超净台面的清洁。超净台旁应常备盛有0.1％新洁尔灭溶液的容器及纱布。 (3)来苏儿水(煤酚皂溶液)：主要用于无菌室桌椅、墙壁、地面的消毒和清洗，以及空气喷撒消毒，特别是污染细胞的消毒处理。使用浓度请按瓶上说明。现在已经很少使用这类消毒剂。

(4)0.5％过氧乙酸：是强效消毒剂，10 min即可将芽孢菌杀死。用于各种物品的表面消毒，用喷洒和擦拭方式进行。

(5)乳酸蒸气：将乳酸放入坩锅内用酒精灯或电炉加热至沸腾为止。将门窗紧闭1～3 d。可将空气中漂浮的微生物杀死。

(6)37％甲醛加高锰酸钾：使用前先紧闭门窗。将37％甲醛用酒精灯或电炉加热至沸腾后断电或灭火。用一张纸盛好适量的高锰酸钾，迅速放人已加热好的甲醛中形成蒸气。1～3 d后方可达到消毒空气的目的。 6．煮沸消毒

急性消毒可用煮沸法，器械等煮沸15 min后使用。

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清洗消毒注意事项

1．清洗玻璃制品时，浸酸之后一定要用自来水冲洗10～15次。因为残存的洗液对细胞粘附有很大影响。清洗塑料制品时要用棉花或柔软纱布擦洗。千万不要用硬毛刷，否则损害塑料表面后细胞不易贴壁。Tip和Tube一定要用超声清洗处理后逐个清洗。如没有洗净会影响下一次使用的效果。

2．干热灭菌时，应在白天使用烤箱，并不断观察，以免发生意外。当温度超过100℃时，不能再打开烤箱门。器皿烤完后，待温度降至100℃之下才能打开烤箱门。金属器械和橡胶、塑料制品不能使用干热灭菌方法。

3．高压灭菌后器皿务必晾干或烘干，以防包装潮湿发霉。

4．牛血清、大部分培养基、胰酶和一些生物制剂是有机溶液，均不能高压（除菌方法见附件9）。 5．除菌过滤

滤过除菌时，滤器在使用前先装好滤膜(有时可在上面加一层定性滤纸)，包好，经高压灭菌后才能使用。滤过酶类制剂时应待滤器温度降至室温下再进行。过滤时压力不宜过大。压力太大时微孔滤膜可能破裂，或使某些微生物变形而通过滤膜。装滤膜时位置要准确。另外滤器包装时，螺钉不要拧得太紧，以防高压蒸汽不能进入，待高压灭菌之后，再拧紧使用。 6．化学消毒剂

使用化学消毒法时，配制70%-75％酒精应用卫生级，不要用化学纯、分析纯和优质纯酒精。来苏儿水不能用于皮肤消毒，它对皮肤有刺激

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