艾滋病检测技术规范（2009修订版）(4)

全国艾滋病检测技术规范

出，对样品管和盛器消毒，同时报告实验室负责人和上一级实验室技术人员。

4.5.3 检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果污染过重或者认为样品不能被接受，应将样品安全废弃。并将样品情况立即通知送样人。 4.5.4 接收样品时应填写样品接收单。

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第二章 HIV抗体检测

1 范围

本章规定了HIV抗体的检测方法、程序、结果报告、检测策略及质量控制。适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者诊断和监测的实验室依据。

2 规范性引用文件

《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-2008） Guidance for HIV testing in the Western Pacific Region. WHO Draft 19 July 2008.

Statement from the Surveillance and Survey Working Group and the Laboratory Working Group to the Office of the Global AIDS Coordinator.26 Nov.2006.

Guidelines for the use of the BED assay for incidence estimation and surveillance in resource-limited countries. Atlanta, 5 June 2006.

Revised Guidelines for HIV Counseling, Testing, and Referral. U.S. CDC 2001. Current HIV-2 diagnostic strategy overestimates HIV-2 prevalence in China. Journal of Medical Virology, 2009, 81: 790-797.

3 HIV抗体检测实验室要求

应符合《全国艾滋病检测工作管理办法（2006）》中对实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。

实验室的质量保证和实验室安全防护按本规范相关章节规定执行。

4 HIV抗体检测的目的和要点 4.1 HIV抗体检测的目的

4.1.1 HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。

4.1.2 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。

4.1.3 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 4.1.4 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。 4.2 HIV抗体检测的要点

4.2.1 根据目的选择检测方法及检测策略。 4.2.2 严格遵守实验室SOP。

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4.2.3 筛查试验阳性，须作确证试验。 4.2.4 筛查试验阴性， 不应做确证试验。 4.2.5 筛查及确证试验阳性均应做好咨询工作。

5 以诊断为目的的检测策略 5.1 常规HIV抗体检测的方法和程序

HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确证试验。 5.1.1 筛查试验 5.1.1.1 筛查试剂

必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，其中酶联免疫试剂应批批检合格。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。 5.1.1.2 筛查样品

HIV抗体筛查可采用血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液样品。 5.1.1.3 筛查方法

（1）酶联免疫吸附试验（ELISA）

可使用血液、唾液、尿液样品，ELISA多为单纯HIV抗体检测试剂。HIV抗原抗体联合检测试剂可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体，加底物显色，用酶标仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。

（2）化学发光或免疫荧光试验

这类试剂采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。

（3）快速检测（RT）及其它检测试验

这类试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。一般可在10～30分钟内得出结果。

明胶颗粒凝集试验（PA）：是HIV血清抗体检测的一种简便方法。将HIV抗原致敏明胶颗粒

作为载体，与待检样品作用。当待检样品含有HIV抗体时，明胶颗粒与抗体发生凝集反应，根据凝集情况判读结果。PA试剂有两种:同时检测HIV-1和HIV-2抗体以及分别检测HIV-1和HIV-2抗体。有效试验必须有阴性和阳性质控。

免疫渗滤试验：斑点ELISA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验：均以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状固定在膜上，加待检样品。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10分钟以内。有效试验的质控点必须显色。

免疫层析试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原线状固定在膜上，待检样品（血液或唾液）沿着固相载体迁移，阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带。有效试验的质控带必须显色。 5.1.1.4 筛查程序

（1）初筛试验

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根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛检测，对呈阴性反应的样品，可出具HIV抗体阴性（-）报告；对呈阳性反应的样品，需要进一步做复检试验和确证试验。

（2）复检试验

对初筛呈阳性反应的样品，应使用原有试剂和另外一种不同原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验。如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。如两种试剂复检均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性（-）；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确证实验室进行确证试验（图1）。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应，而抗体试剂检测为阴性反应，则应考虑进行HIV-1 p24抗原或核酸检测，必要时进行随访。

艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样品，确证实验室可以直接进行确证试验。 （3）初筛和复检流程 （图1）

样品 筛查试剂 初筛试验 阳性反应 阴性反应 原有试剂 + 另一不同原理 （ 或厂家 ） 试剂或另外两种 不同原理 （ 或厂家 ） 试剂 复检试验 均阳性反应 一阴一阳 均阴性反应 确证试验 报告阴性 图 1 HIV 抗体筛查检测流程

（4）筛查试验结果的报告

HIV抗体筛查试验用附表1进行报告，阴性反应报告为“HIV抗体阴性（-）”；阳性反应报告为“HIV抗体待复检”。

（5）筛查试验呈阳性反应样品的转送

如需送上级实验室进行复检，需要核对身份，补充个人信息（如姓名和身份证号码），必要时采集第二份血样，持HIV抗体筛查报告，送当地艾滋病筛查中心实验室，或直接送确证实验室

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复检。HIV抗体复检试验用附表2 进行报告，两次检测均阳性或一阴一阳报告为 “HIV抗体待确证”；两次检测均阴性报告为“HIV抗体阴性（-）”。HIV抗体复检报告需由1名检验人员和1名审核人员签字。 5.1.2 确证试验 5.1.2.1 确证试剂

必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。 5.1.2.2 确证样品

可采用血清、血浆、滤纸干血斑样品。 5.1.2.3 确证方法

包括免疫印迹试验（WB）、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）等。

5.1.2.4 确证流程 （图2）

使用HIV-1/2混合型试剂进行检测，如果呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性（－）；如果呈阳性反应，则报告HIV-1抗体阳性（＋）；如果不是阴性反应，但又不满足阳性判断标准，则报告HIV抗体不确定（±）。结合流行病学资料，可以在4周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性；满足HIV抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。随访期间可根据需要，检测病毒核酸或P24抗原作为辅助诊断。如果出现HIV-2型的特异性指示条带，根据实际情况需用HIV-2型免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确证试验或HIV-2核酸检测，以进一步明确HIV-2感染状态，疑难样品送国家艾滋病参比实验室进一步分析。

筛查试验阳性反应样品 确证试剂 阴性反应 HIV- 1 阳 性反应 不确定反应 出现HIV - 2 指 示条带 报告阴性 报告HIV - 1 阳 性 根据具体情况进一步检测 HIV- 2 结合流行病学资料，可以在4周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性；满足HIV抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。 图2 HIV抗体确证检测流程

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