微生物学检验重点(8)

适用于医学检验专业的同学们,仅供参考哦。

①原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在咦接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。

②方法：

a.接种：用无菌棉签浸入细菌悬液中，将拭子在试管壁上轻轻挤压以挤去过多的菌液。棉签在三个方向均匀涂抹琼脂表面（每次转60°）使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周；

b.贴放药物纸片：平板置室温干燥3~5分钟后，用纸片分配器或无菌镊子贴上标准抗生素纸片，用镊子轻压纸片使之与琼脂紧贴。各抗菌纸片中心距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。

c.培养：贴好纸片15min内，置35℃孵育16~18h后阅读结果；苛养菌应孵育在含5%CO2的环境中孵育20~24h；葡萄球菌和肠球菌对甲氧西林和万古霉素的药敏试验应孵育24h。平板最好单独平放，不超过2个，使平板受热均匀。

③影响因素：培养基，菌量，药敏纸片，操作方法，培养条件、温度和时间的控制，抑菌圈测量工具的精度及测量方法，质控标准菌株本身的药敏特性是否合格、有无变异。

④质量控制：教材P116

3、稀释法的原理：

①微量稀释法：聚乙烯板内含有各种稀释度的抗菌药物，加入定量菌液经一定时间培养后观察结果。凡孔底部清晰不出现细菌沉淀的最低药物浓度即为该抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度（MIC）。

②琼脂稀释法：接种待测的菌株至含不同浓度抗菌药物的MH琼脂平板上，经一定时间和温度的培养后，无细菌生长的最低药物浓度即为测试菌的MIC。

4、β-内酰胺酶检测的方法：①淀粉测定法：检测菌产生酶，使碘化物转变为无色

②头孢硝噻吩纸片法：纸片由黄色变为红色为阳性

5、联合药敏试验的主要指针：

①敏感（S）：是指所分离菌株能被测试药物使用推荐剂量时在感染部位通常可达到的抗菌药物浓度所抑

制。常用剂量在体内所达血药浓度大于该药对某菌的MIC

②耐药（R）：是指所分离菌株不被测试药物常规剂量可达到的药物浓度所抑制和（或）证明分离菌株

可能存在某些特定的耐药机制，或治疗研究显示药物对分离菌株的临床治疗不可靠。常用剂量在体内血

药浓度小于该药物对某种细菌的MBC，有时某菌可产生灭活该菌的酶，则不论MIC大小，均为耐药。

③中介（I）：是指抗菌药物在生理浓集的部位具有临床效果，还代表敏感与耐药之间的缓冲区，以避免

微笑的、不能控制的技术因素造成重大的结果解释错误。

④最低杀菌浓度（MBC）：在体外试验中，抗菌药物能使试验菌最初的活菌总数减少99.9%或以上需要

的最低药物浓度也是药物的抗菌活性指标，提示药物杀灭病原菌的能力（µg/ml）

⑤最低抑菌浓度（MIC）：在体外试验中，抗菌药物抑制培养基中某种细菌生长最低药物浓度，是药物

抗菌活性指标，提示药物的抑菌能力（µg/ml）

MIC50和MIC90：指在一批实验中能抑制50%和90%受试菌生长所需的MIC

（六）金黄色葡萄球菌、A、B、 D群链球菌、肠球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的致

病因素、分离鉴定方法与鉴别 （溶血性、触酶、氧化酶等）

1、金黄色葡萄球菌致病因素：①葡萄球菌溶血毒素：α、β、γ、δ等；②耐热肠毒素：破坏RBC、

WBC、血小板及肝细胞等；③毒素休克综合征毒素；④杀白细胞素、表皮剥脱毒素。

主要通过外圆形或内源性感染两种途径引起：化脓性感染、毒素样疾病、葡萄球菌性肠炎

2、A、B、D群链球菌及肺炎链球菌致病因素：

（1）β-溶血链球菌：

A群链球菌：①溶血毒素O（SLO）：免疫原性强，可刺激机体产生抗“O”抗体；②溶血毒素S（SLS）：

无免疫原性，BAP上溶血现象由SLS引起

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