微生物学检验重点(3)

适用于医学检验专业的同学们,仅供参考哦。

（三）培养基的制备方法，常用培养基的原理及用途（SS MAC MIU O/F采用的指示剂，结果观察等），常见生化反应的原理

1、制备程序：调配—>溶化—>矫正pH—>过滤澄清—>分装—>灭菌—>检定—>保存

矫正pH：一般将培养基的pH值矫正至7.4~7.6。由于培养基经高压灭菌后，其pH降低约0.1~0.2，因此矫正时pH应比实际值高0.1~0.2

分装：①基础培养基：一般分装于三角烧瓶，灭菌后备用；②琼脂平板；③半固体培养基：一般分装于试管中，分装量约为试管长度的1/3，灭菌后直立凝固待用；④琼脂斜面：分装量约为试管1/5，灭菌后趁热放置斜面凝固，斜面长度约为试管长度的2/3；⑤液体培养基：分装与试管，分装量为试管长度的1/3，灭菌后备用

保存：标记名称、制备时间等，保鲜袋内存放于4℃冰箱或冷暗处，保存时间一般不超2周。

2、常用培养基的原理及用途

（1）SS：强选择分离致病肠杆菌（2）MAC：弱选择分离正常肠杆菌

（3）MIU：①原理：见各试验各自原理。动力：有鞭毛的细菌有动力，穿刺培养后穿刺线不清晰。

②用途：检测细菌动力+靛基质试验（吲哚试验）+尿素酶试验

③结果观察：a.接种线变宽、变模糊，培养基变浑浊为动力阳性；

b.加入靛基质试剂后形成玫瑰吲哚，则为靛基质试验阳性；

c.整只试管变为桃红色，则为尿素酶试验为阳性（产生尿素酸分解培养基中尿素产碱，使酚磺酞指示

剂显桃红色）

（4）KIA：①原理：乳糖发酵+葡萄糖发酵+葡萄糖产气+硫化氢

②用途：肠杆菌科细菌的鉴定和鉴别。

③结果判断：a.整个培养基呈黄色，则乳糖发酵阳性；b.斜面呈红色，则葡萄糖发酵阳性；

c.试管底部有气泡，说明葡萄糖产气阳性；d.整只试管变黑，则硫化氢阳性（细菌能分解培养基中硫

氨基酸，可产生H2S，H2S与培养基中枸橼酸钠铵铁反应，产生黑色FeS）

（5）O/F：①原理：细菌分解葡萄糖产生有机酸，使培养基pH下降，培养基由绿色变为黄色。

指示剂溴麝香草酚蓝（黄色<—绿色—>蓝色）

②用途：用于肠杆菌和非发酵菌的鉴别，葡萄球菌和微球菌的鉴别

③结果判断：O：开放管变黄，封闭管不变（绿色）；F：开放管变黄，封闭管也变黄；K：开放管不

变，封闭管变绿（产碱）；N：开放管不变，封闭管也不变（不利用）

3、常见生化反应的原理

（一）十个基础试验

IMViC试验：I——吲哚试验 M——甲基红试验 V——V-P试验 C——枸橼酸盐试验

1、糖（醇、苷）类发酵试验

①原理：细菌分解糖产生有机酸，使培养基pH下降，指示剂溴甲酚紫由紫变黄（酚红则是由红变

黄），如该菌具有甲酸解氢酶，可进一步分解甲酸产生H2和CO2，使倒插管中出现气泡。

②方法：细菌接种糖发酵管，37℃、24h孵育后观察结果

③结果判断：有的细菌能分解某些糖产酸产气（AG/+），有的只能产酸而不产气（A/+），有的则不

能分解糖类（N/-）

2、葡萄糖氧化/发酵试验（O/F试验）

①原理：细菌分解葡萄糖产生有机酸，使培养基pH下降，指示剂溴麝香草酚蓝（黄色<—绿色—>

蓝色）

②方法：2支试管，一只加灭菌的液体石蜡覆盖，使培养基与空气隔绝；另一只不加灭菌的液体石

蜡，培养基暴露于空气中。35℃培养18~24h后，观察结果

③结果判断：氧化型细菌（O）——仅在有氧环境中分解葡萄糖，在无氧环境中不分解，加液体石

蜡不变色，不加液体石蜡变色；

发酵型细菌(F)——在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，两管均变色

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