实验一 鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法(8)

实验一 鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法

禽，可通过鼻孔挤出粘液，或将棉拭子插入鼻裂中取样。

（2）培养基制备：马丁琼脂培养基（本实验中采用该培养基）、5％鸡血清葡萄糖淀粉琼脂、鲜血琼脂培养基。

（3）动物接种：如果病料污染严重，则可将0.2mL碾碎的病料，经皮下或腹腔内接种家兔、小鼠或易感鸡，接种动物在24h～48h内死亡，可以从肝脏、心血中分离到巴氏杆菌。

（4）培养：将病料接种于马丁琼脂培养基在35℃～37℃下培养，经18h～24h培养后菌落直径为1mm～3mm，菌落呈散在、圆形，表面凸起呈奶滴状。

注意：如果病料未污染，（3）、（4）步骤可省略。 ⒌ 病原鉴定

（1）培养特性：为兼性厌气菌，生长最适温度为35℃～37℃，经18h～24h培养后，菌落直径为l mm～3mm，呈散在的圆形凸起和奶油状，有荚膜菌落稍大。

（2）镜检：从菌落上挑取少量涂片，干燥，固定、染色、镜检同上。 （3）生化鉴定：

1．糖发酵试验：取纯培养物分别接种葡萄糖、单奶糖、甘露醇、蔗糖、麦芽糖、乳糖、鼠李糖发酵管，37℃培养2～3d，观察结果。

2．吲哚试验：取纯培养物接种蛋白胨水，37℃培养2～3d，加入吲哚试剂，观察结果。 3．硫化氢试验：取纯培养物接种醋酸铅琼脂，37℃培养18～24h，观察结果。 4．对紫乳作用的观察：取纯培养物接种紫乳培养基，37℃培养2～3d，观察结果。 巴氏杆菌生化试验

注： + 糖发酵试验中表示产酸不产气、其它试验中表示阳性； - 阴性。

⒍ 动物试验

1．取病料制成1:10乳剂，或用细菌的培养液。

2．取0.2～0.5ml皮下注射小白鼠，经24～48h动物死亡。置解剖盘内剖检观察其败血症变化，同时取心血、肝、脾组织涂片，分别进行美蓝染色或瑞氏染色、革兰氏染色，镜检可见大量两极浓染球杆状的巴氏杆菌，革兰氏染色阴性。 7. 结果判定：

依据病原分离培养特性、生化鉴定、动物接种试验可作出确切诊断。 5．教学方式 讲述与实践 6．考核要求

实验报告 7．实验报告要求

⒈ 禽巴氏杆菌病的临诊表现和病理解剖变化？ ⒉ 疑似巴氏杆菌病的病鸡，如何进行微生物学诊断？

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