实验一 鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法(7)

实验一 鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法

实习三 禽霍乱(禽巴氏杆菌病)诊断技术（综合性）

（三个实验计9学时）

1．本次实验的目的和要求

（1）观察家禽巴氏杆菌病的临诊表现和病理解剖变化 （2）掌握禽巴氏杆菌病的微生物学诊断方法 2．实验内容或原理

根据典型症状和病变，以及在显微镜下检查组织涂片发现的两极染色的杆菌，可初步诊断本病。但确诊应依靠病原分离鉴定，病原分离鉴定原理为革兰氏染色法。 3．需用的仪器或试剂等

动物：鸡、小白鼠

器材：外科镊子、外科剪、灭菌纱布、载玻片、糖发酵管等。

药品：草酸铵结晶紫、革兰氏碘、碳酸复红、瑞特氏染液、美蓝染液、棉拭子、接种环、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、甘露醇、鼠李糖、戊醛糖、纤维二糖、绵子糖、菊糖、赤藓糖、戊五醇、M—肌醇、水杨苷。胰蛋白酶、L-胱胺酸、琼脂粉、酚红。 4．实验步骤

一、临床症状和病理变化

⒈ 症状

（1）急性症状:描述 （2）慢性症状:描述 ⒉ 病理变化:描述

二 、微生物学诊断

⒈ 抹片的制备

用镊子夹持病变组织肝或脾，然后以灭菌剪刀剪取小块，夹出后将其新鲜切面在载玻片上压印或涂抹成薄层；若取血液，用灭菌剪刀剪开心脏进行蘸取或剪取凝血块，用新鲜切面在载玻片上压印或涂抹成薄层。自然干燥。将干燥好的抹片，涂抹面向上，以其背面在酒精火焰上来回通过数次，略作加热进行固定。 ⒉ 革兰氏染色法

固定好的抹片上滴加草酸铵结晶紫色液，染色2min→水洗+加革兰氏碘溶液于抹片上媒染2min→水洗→加95％酒精于抹片上脱色1min→水洗→加稀释碳酸复红复染30s→水洗→吸干→镜检。巴氏杆菌为革兰氏阴性球杆菌或短杆菌，单个或成对存在，常有荚膜。 ⒊ 其他染色法

甲醇固定，瑞特氏或美蓝染色呈两极浓染的菌体。 ⒋ 病原分离

（1）病料的采集：最急性和急性病例可采集死亡禽只的肝、脾、心血；慢性病例一般采集局部病灶组织；对不新鲜或已被污染的样品，可自骨髓中采取病料。采病料时用烧红的刀片烧烙组织，而后用灭菌棉拭子或接种环通过烧烙表面插入组织或心血内取样。如果为活

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