实验一 鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法(2)

实验一 鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法

每只鸡应更换一个注射器，严禁交叉使用。 ④ 稀释液：为灭菌的生理盐水。

⑤ 红细胞保存液的配制方法：葡萄糖2.05克，柠檬酸钠(SHOO)0.80克，柠檬酸(2H20)0.055克，氯化钠0.42克，蒸馏水加至100毫升。过滤分装，高压灭菌10分钟，放4℃冰箱保存。 (2)红细胞凝集试验(HA) 主要是测定病毒的红细胞凝集价，以确定红细胞凝集抑制试验所用病毒稀释倍数(抗原单位)。

鸡新城疫病毒的HA试验与HI试验现采用微量法，以u或v形微孔塑料板代替试管。 ① 首先用移液器向每个孔加入稀释液一滴(0.05毫升)。

② 用微量移液器取病毒抗原0.05毫升，加入第一孔，反复抽动6次后，吸出0.05毫升加入第二孔，在第二孔反复抽动6次后，吸出0.05毫升加入第三孔，如此连续稀释至第十一孔后吸出0.05毫升弃去。第12孔不加病毒液为红细胞空白对照。

判断：沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。

如上例：病毒液的HA效价以出现完全凝集的抗原最大稀释度为准。HI试验时，病毒抗原液为0.05毫升内须含4个凝集单位，则应将原病毒液作成64／4=16倍的稀释液。

孔号： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 滴度： 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:517 1:1024 1:2048 对照

红细胞悬液 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 作用时间与温度 轻轻振荡1-2min 静置30-60min

结 果 +++ +++ +++ +++ +++ +++ ++ ﹣ ﹣ ﹣ ﹣ ﹣

注意：+++为完全凝集 ++为部分凝集 — 为不凝集

(3)红细胞凝集抑制试验(HI试验)：新城疫病毒凝集红细胞的作用，能被特异性抗体抑制，因此，可用HI试验(简称血凝抑制试验)测定鸡血清中的HI抗体效价(滴度)，并可用标准血清，作新分离病毒的鉴定与未知病毒的诊断。 微量法：具体操作如下：

①用移液器向每孔加0.05毫升稀释液，十一孔加0.1毫升。

②用移液器吸取被检血清(或高免卵黄抗体)0.05毫升注入第一孔，抽放6次后，吸出0.05毫升，注入第二孔，如此连续稀释至第10孔，并从第十孔吸出0.05毫升弃去，血清稀释倍数依次为1：2～1024，11孔和12孔空白。

③ 每孔再加入已标定好的四单位病毒液0.05毫升，第十一孔为红细胞对照孔，不加病毒液。

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