Waters高效液相色谱仪标准操作规程

Waters高效液相色谱仪标准操作规程

1. 目的

描述Waters高效液相色谱仪标准操作规程。

2.适用范围

化验室

3.责任者

化验员应严格遵照该操作规程,QC主管负责监督本规程的实施。

4.定义

HPLCHighPerformanceLiquidChromatography,高效液相色谱仪。

5.安全注意事项

5.1有机溶媒有害健康，各溶剂瓶口应封严。

5.2注意检查废液桶中废液应避光，防止废液桶满外溢。

6.规程

6.1.WatersHPLC的组成：贮液器?输液泵?自动进样器?分离柱(柱温箱)?紫外检测器?控制及数据处理系统(Millennium32化学工作站)。

6.2.HPLC系统的打开及关闭顺序

6.2.1打开顺序

·对于分体式：请按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开开关，待各部分分别显示初始化完毕后，最后打开Millennium32化学工作站。

泵与色谱工作站的连接：对于510泵，因为此泵与色谱工作站是单向联系，

如要使泵在Remote状态下由工作站控制，首先要在泵的键盘上按Menu键，待显示屏切换至Mode状态下，其状态是Loca，按Edit/Enter键，在Local的L前有闪动的光标显示，按ù键，Local转换成Rem，再按Edit/Enter键，此命令已输入进去,最后按Stop/Run键，使泵处于Run状态这时泵和工作站的连接即告成功。泵的任何动作都可由工作站来控制。还应注意这一步工作在每次开机时都要进行。

对于Alliance2690系统：先打开Alliance2690主机、检测器电源开关，待初始化完毕后，再进入Millennium

对于流动相的要求：对于液体试剂应尽量采用色谱纯试剂；对于所用到的固体试剂应采用分析纯试剂；对于水，应采用经纯水机处理过的超纯水；流动相在使用前一定要经0.45mm的滤膜（滤膜分为水相膜与有机相膜，确保使用正确的滤膜，参见附表)过滤、超声真空脱气方可使用，严禁含盐的流动相未经过滤直接使用。

应养成良好操作习惯：

规范操作，树立保护HPLC整套系统的概念，尤其对于输液泵、色谱柱、检测器，在使用后应及时冲洗，以免污染而使其寿命缩短或损坏，尤其如操作者使用了含盐的流动相，更应注意清洗的步骤：首先用脱过气的纯水在流速为1ml/min左右冲洗30～60分钟，再用含50％以上甲醇或乙腈的水溶液以相同的流速冲洗20～30分钟左右。

如要卸下柱子，在经过上述冲洗过程之后，再经纯甲醇或乙腈以1ml/min的流速冲洗20~30分钟，柱子卸下后应马上拧紧柱堵。

流速的变化应采用阶梯式递增或递减的方式，启动泵时，应在2分钟之内由小流速慢慢增大到所需的流速，泵关闭时亦然(流速递减)。切忌流速的骤变。

6.2.2关闭顺序

首先退出Millennium32化学工作站，再关闭系统的其他部分。 6.3.Millennium

32

32

化学工作站。

化学工作站

Millennium

32

色谱管理系统是集数据采集、处理、HPLC系统的控制、结果的管

理、报告的打印为一体的综合系统。下面就着重介绍该系统的基本操作知识。

6.3.1Millennium32化学工作站的进入

打开化学工作站，系统自动进入ProgramManager界面，双击Millennium肖像，这时进入Millennium界面，双击SessionManager图标，系统将自动初始化，以使工作站和HPLC整套系统进行联接。初始化后，按系统要求键入你的UserName和Password，这时你已进入该系统。

6.3.2Project的进入和建立

·Project的进入：在SessionManager窗口下，击Project肖像(或从View中选择Projects),在其中有已建好的Project，双击你所需的Project肖像，再进行你想做的工作。

·Project的建立

从File中选择New，即显示NewProject的画面。

在ProjectName中输入你的Project名称。

在InitiallzeProject项目中选择Copy中的filterandfields或Methods。

在FromProject中选择要拷贝的现存Project。

选择Tablespacesize。

选OK，存贮并退出。

当Millennium软件在建立一个新的Project时，在屏幕上及时显示出完成建立新Project的百分比。当达到100%时，在SessionManager画面即出现一个新的Project肖像。

6.3.3收集数据的一般过程

使用Millennuium32收集数据的一般过程如下：在Project窗口内建立收集数据所需仪器的仪器方法；建立包括此仪器方法的方法组；使用此方法组收集数据。

本部分包括：建立仪器方法，建立方法组，收集样品。

·建立/修改仪器方法

从SessoinManager窗口，打开所需的Project。

选择Method按钮，现存的方法的肖像即出现在屏幕上。

从命令菜单中选择

File，然后选择其中的

NewInstrumentMethod，即出现

SystemOpen对话框。

在目录中选择收集数据需要使用的色谱硬件系统的名称，如：System_1。按OK，这时InstrumentMethod窗口即显示出来。

窗口的上部分是该系统的所有仪器的肖像。用鼠标器将需要设定仪器参数的仪器部件激活，然后在仪器肖像上双击两下，即出现InstrumentDialogBox画面。

对各个部件设置操作条件，或通过输入新的参数来更改以前的参数。例如：定义泵参数，先双击SIM/PCM的肖像。填写泵参数，按OK。

当所有参数设置完成后，按OK。即回到InstrumentMethod窗口。选File中的SaveAs存贮仪器方法文件，如有需要，起一文件名，按OK。

选择File中的Exit，即回到Project窗口。新的仪器方法肖像即出现在此窗口下。

·建立方法组(MethodSet)

仪器方法编好后，必须存于一方法组中，才能在QuickSetControl中调用。 在Project窗口下选方法肖像。

选File中的NewMethodSet，即显示出MethodSet对话框。

在此画面的InstrumentMethod一栏，选择已确定的仪器方法。其他项目可空着

不填。然后选File，SaveAs。输入方法组名后，按OK。

选File，Exit。即退回到Project窗口。新设置的方法组肖像即出现在此窗口下。

·收集样品：完成以上各步骤后，即可收集样品。

在Project窗口下选择QuickSetControl肖像。出现SystemOpen对话框。

选择建立仪器方法时确定的色谱硬件系统，按OK。即出现QuickSetControl窗口。

在此窗口下的SampleLoadingTable中用鼠标器按第一行，这时Millennium软件会自动填充各项初始参数。通过输入新值可更改表中的各项参数，表中的瓶号(对于高效液相色谱仪的进样表，除另有规定外，按括号法安排进样顺序。即第一针为标准品1作为系统适用性共进6针，要求RSD不大于2%，随后为标准品2，进样次数为2针，然后为样品1到样品3，各进2针。样品3后为标准品1，依次类推，直到将所有样品都安排在进样表中)进样次数，进样体积，运行时间等项目对自动进样器有控制作用。

在MethodSetReport一列中选择在前面刚刚建立的方法组。

在运行方式(mode)中选RunOnly。

选择进样方式：菜单mode下选单个样品或样品组进样。

将SampleLoadingTable中第一行点黑。击SetupInstrument按钮，启动系统。

系统启动后可击baselinemonitor图标，即可观察基线。

待基线平稳后，击绿灯或样品盘肖像准备进样。出现Injectorwait提示信息，随即进样。

在样品测试过程中，系统会在QuickSet窗口下显示瓶号和进样次数及运行时间。并可在此窗口下观察检测器的输出情况。屏幕上显示的检测器输出是自动满量程方式(即自动按最大信号满格输出)。

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