细胞凝集反应实验报告

细胞生物学实验报告

一．

二．

实验名称：细胞凝集反应

实验原理：

细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分支状糖外被。目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分支状糖分子有关。

凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。

凝集素是指一种从各种植物，无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红血球(含血型物质)，故名凝集素。常用的为植物凝集素(Phytoagglutin, PNA)，通常以其被提取的植物命名，如刀豆素

A(Conconvalina,ConA)、麦胚素(Wheat germ agglutinin, WGA)、花生凝集素(Peanut agglutinin, PNA)和大豆凝集素(Soybean agglutinin, SBA)等，凝集素是它们的总称。凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，它们具有的某些“亲合”特性，能被免疫细胞化学技术方法所应用。 血型鉴别实验，也是凝集反应的一种。

三． 实验用品：

土豆块茎

显微镜，粗天平，载玻片，滴管2支，离心管2支

PBS缓冲液：称取NaCl7.2g，Na2HPO41.48g,KH2PO40.43g,加蒸馏水，定容至1000ml，调pH值到7.2. 4.2%的红细胞

四． 实验步骤：

1. 称取土豆去皮块茎2g，加10mlPBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含

有可溶性土豆凝集素。

2. 以无菌方法抽取兔子静脉血液（加抗凝剂），加生理盐水3ml，在

1000r/min，离心5min，重复3次离心，最后按压积红细胞体积用生理盐水配成1%红细胞液。

3. 分别用滴管吸取土豆凝集素和1%红细胞液各一滴，置双凹片左孔内，充

分混匀。

4. 同时分别用滴管吸取PBS缓冲液和1%的红细胞悬液各一滴，置双凹片右

孔内，充分混匀，做对照实验。

5. 摇晃5—10min后，观察有无发生细胞凝集并置显微镜下观察。

五． 实验结果： 试剂 土豆凝集素 PBS缓冲液 在振荡过程中，溶液中在振荡过程中，红细胞的红细胞渐渐凝集成颗不断向中间靠拢，最终现象 粒状，逐渐聚拢，最后形成中间颜色较深，边在液滴中形成一大块血缘颜色较浅的红细胞浑红色血块。 浊溶液。 结果 红细胞发生凝集 红细胞未发生凝集 土豆凝集素可使血液发生凝集，PBS缓冲液不能使说明结论 血液发生凝集。

图左为PBS缓冲液对照 图右为土豆凝集素

图一 图二 土豆凝集素（*4） 图一中为在振荡了11min后，细胞凝集的现象，中间凝结成血块，周围叫澄清，边缘为干涸的红细胞凝结成的颗粒附着在玻片上。在低倍镜（*4）下观察，可以看到红细胞凝结成块状，周围液体近乎透明，说明红细胞发生了凝集。

图三 图四 PBS缓冲液（*4） 图三中为在振荡了之后，红细胞并没有聚集成颗粒状，只是由于向心力左右而聚拢在一起呈透明凝胶状。在低倍镜（*4）下观察可见到均匀的透明液体，没有红细胞凝结而成的颗粒。

六． 实验分析：

实验所得结果可见，红细胞并没有如预期那般在中央凝结成大血块，而周围近乎透明，分析其原因可能为：

（1） 在滴加土豆凝集素时，没有加入半滴，而是加入了一滴，反而导致了

细胞凝集效果下降。

（2） 在晃动过程中，速度过慢，且晃晃停停，导致红细胞凝结成的颗粒状

在玻片上凝固。

（3） 血浆浓度的影响，血浆浓度不合适导致细胞凝集作用减弱。

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