DNA重组技术 分子生物学 - 图文(7)

第二节基因工程的酶学基础（5）同裂酶（Isoschizomers)：识别位点的序列相同的限制性内切酶。①完全同裂酶：识别位点和切点完全相同。如Hind Ⅲ和Hsu I。Hind Ⅲ5’-A?AGCTT-3’ 3’-TTCGA?A-5’Hsu I 5’-A?AGCTT-3’ 3’-TTCGA?A-5’②不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。如Xma I 和Sma I。Xma I 5’-C?CCGGG -3’3’-GGGCC?C-5’Sma I 5’-CCC?GGG-3’3’-GGG?CCC-5’第二节基因工程的酶学基础（6）同尾酶(Isocaudamers）：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。如BamH I、Bgl Ⅱ、Bcl I、Xho Ⅱ等。5’-G?GATCC-3’ 3’-CCTAG?G-5’Bgl ⅡBcl I5’-T?GATCA-3’ 3’-ACTAG?T-5’ Xho Ⅱ5’-U?GATCY-3’ 3’-YCTAG?U-5’ 5’-A?GATCT-3’ 3’-TCTAG?A-5’BamH IU代表嘌呤；Y代表嘧啶。5’-?GATC----3’ Sau 3A3’----CTAG?-5’ 同尾酶的粘性末端互相结合后形成的新位点一般不能再被原来的酶识别。？5’-G BamH I3’-CCTAGGATCT-3’ A-5’Bgl ⅡBamH I5’-GGATCT-3’ 3’-CCTAGA-5’Sau 3ABgl Ⅱ第二节基因工程的酶学基础（7）限制酶的酶活性：限制性内切酶的识别和酶切活性一般在一定的温度、离子强度、pH等条件下才表现最佳切割能力和位点的专一性。因此，一般使用专一的反应缓冲液。EcoR I：GAATTC在低盐、高pH（>8）时可识别和切割GAATTA、AAATTC、GAGTTC等星号（*）活性：如果改变反应条件就会影响酶的专一性和切割效率，称为星号（*）活性。EcoR I和BamH I等都有*活性。第二节基因工程的酶学基础

（8）Ⅱs型限制性内切酶

移动切割（shifted cleavage)：在离它的不对称识别位点一侧的特定距离处切割DNA双链。长度为4-7bp ，切割位点可能在识别位点一侧的20bp 范围内。Hga I5’GACGCNNNNN?3’CTGCGNNNNNNNNNN?

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