DNA重组技术 分子生物学 - 图文(6)

第二节1.2.2 II类限制性内切酶基因工程的酶学基础首先由H.O. Smith和K.W. Wilcox在1970年从流感嗜血菌中分离出来。分离的第一个酶是Hind Ⅱ。（1）识别位点序列：未甲基化修饰的双链DNA上的特殊靶序列（多数是回文序列），与DNA的来源无关。（2）切割位点：识别位点处。切开双链DNA，形成粘性末端（sticky end）或平末端（blunt end）。EcoR I5’-G?AATTC-3’3’-CTTAA?G-5’Pst I5’-CTGCA?G-3’3’-G?ACGTC-5’产生粘性末端EcoR V5’-GAT?ATC-3’3’-CTA?TAG-5’产生平末端第二节基因工程的酶学基础（3）粘性末端：含有几个核苷酸单链的末端。5’-3’-5’-3’-G?AATTCCTTAA?GG AATTCCTTAAG5’端凸出（如EcoR I切点）-3’-5’-3’-5’第二节5’-3’-基因工程的酶学基础CTGCA?GG?ACGTC-3’-5’5’-3’-CTGCA GG ACGTC3’端凸出（如Pst I切点）-3’-5’第二节

（4）粘性末端的意义①连接便利

基因工程的酶学基础

i）不同的DNA双链：只要粘性末端碱基互补就可以连接，这比连接两个平齐末端容易的多。ii）同一个DNA分子内连接：通过两个相同的粘性末端可以连接成环

形分子。②5’末端标记：凸出的5’末端可用DNA多核苷酸激酶进行32P标记。凸出的3’端可以通过末端转移酶添加几个多聚核苷酸的尾巴（如AAA或TTT等）造成人工粘性末端。③补平成平齐末端：粘性末端可以用DNA聚合酶补平成平齐末端。

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