无菌制剂(滴眼剂)培养基模拟灌装工艺验证(3)

培养基模拟灌装验证 VPZ17001

24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 综合无菌制剂车间C级洁净区工作服清洗标准操作规程 综合无菌制剂车间洁净区清洁工具清洁操作规程 综合无菌制剂车间人员进出一般生产区更衣操作规程 综合无菌制剂车间人员进出D级洁净区更衣操作规程 综合无菌制剂车间人员进出C级洁净区更衣操作规程 综合无菌制剂车间传递窗清洁操作规程 综合无菌制剂车间卫生间清洁操作规程 综合无菌制剂车间过滤器使用清洁操作规程 综合无菌制剂车间人员进入生产区手清洁消毒操作规程 综合无菌制剂车间一般生产区洗衣岗位操作规程 综合无菌制剂车间A/B级洁净区工作服清洗标准操作规程 综合无菌制剂车间洁净区清洁标准操作规程 综合无菌制剂车间一般区清洁标准操作规程 综合无菌制剂车间烘手器操标准操作规程 综合无菌制剂车间烘手器清洁标准操作规程 综合无菌制剂车间手消毒器标准操作规程 综合无菌制剂车间手消毒器清洁标准操作规程 SOPPZ7032-00 SOPPZ7033-00 SOPPZ7034-00 SOPPZ7035-00 SOPPZ7036-00 SOPPZ7037-00 SOPPZ7038-00 SOPPZ7039-00 SOPPZ7040-00 SOPPZ7026-00 SOPPZ7027-00 SOPPZ7028-00 SOPPZ7029-00 SOPPZ7030-00 SOPPZ7031-00 SOPPZ7024-00 SOPPZ7025-00 6.3 相关的设备标准操作规程 序号 名称 1 2 3 4 5 全自动眼液外盖（内塞）清洗机标准操作规程 高速小圆瓶理瓶机标准操作规程 立式洗瓶机标准操作规程 隧道式过氧化氢灭菌烘箱标准操作规程 灌装加塞旋盖机标准操作规程 文件编号 SOPPZ23001-00 SOPPZ23002-00 SOPPZ23003-00 SOPPZ23004-00 SOPPZ23005-00 第 11 页 共 51 页

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6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 干热灭菌柜标准操作规程 脉动真空灭菌器（纯蒸汽）标准操作规程 FFU小推车一台标准操作规程 配液罐标准操作规程 灯检工作台标准操作规程 微波灭菌机标准操作规程 澄明度检测仪标准操作规程 全自动眼液外盖（内塞）清洗机清洁标准操作规程 高速小圆瓶理瓶机清洁标准操作规程 立式洗瓶机标清洁准操作规程 隧道式过氧化氢灭菌烘箱清洁标准操作规程 灌装加塞旋盖机清洁标准操作规程 干热灭菌柜清洁标准操作规程 脉动真空灭菌器（纯蒸汽）清洁标准操作规程 FFU小推车一台清洁标准操作规程 配液罐清洁标准操作规程 灯检工作台清洁标准操作规程 微波灭菌机清洁标准操作规程 澄明度检测仪标准操作规程 SOPPZ23006-00 SOPPZ23007-00 SOPPZ23008-00 SOPPZ23009-00 SOPPZ23010-00 SOPPZ23011-00 SOPPZ23012-00 SOPPZ23013-00 SOPPZ23014-00 SOPPZ23015-00 SOPPZ23016-00 SOPPZ23017-00 SOPPZ23018-00 SOPPZ23019-00 SOPPZ23020-00 SOPPZ23021-00 SOPPZ23022-00 SOPPZ23023-00 SOPPZ23024-00 6.4 相关验证文件 序号 文件名称 空气净化系统验证报告 粉针生产线厂房验证报告 压缩空气系统验证报告 纯化水制备系统验证报告 注射用水制备系统验证报告 KCZP型超声波自动洗瓶机验证报告 GMS系列隧道式层流灭菌干燥机验证报告 文件编码 第 12 页 共 51 页

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GA55CP-10型固定式螺杆空气压缩机验证报告 CZQ-200纯蒸汽发生器验证报告 RXH-1系列热风循环烘箱验证报告 XG1.U型脉动真空灭菌器验证报告 GCXB型超声波胶塞漂洗罐验证报告 工衣清洗存放验证报告 胶塞清洗存放验证报告 工器具清洗验证报告 玻瓶清洗验证报告 铝盖清洗验证报告 厂房清洁验证报告 KFC系列抗生素玻瓶螺杆分装机验证报告 KFC系列抗生素玻瓶螺杆分装机清洁验证报告 培养基灌装试验报告 BT-300型不干胶自动贴标机验证报告 7培养基

7.1培养基的选择

为了尽可能地检出无菌生产工艺系统中可能会给实际产品造成污染的微生物，所选用的培养基要尽可能适应广谱微生物的生长，包括细菌、霉菌和酵母菌等。验证试验前，要鉴别验证培养基的可行性。首先严格按照培养基生产商的要求进行配制和灭菌，然后将无菌培养基灌装至8ml滴眼剂瓶内。同时制备好三种微生物（枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌）的悬浮液，菌液浓度控制为100～1000个菌/ml。将上述准备无菌培养基分成三等份，且每份至少两瓶，分别加入上述菌悬液各0.1ml。将接枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的培养基于30～35℃下培养，接有白色念珠菌的培养基于20～25℃下培养。如果在7天内，每种微生物培养基均至少有50％长菌，则认为该培养基可用于无菌工艺验证试验。根据《无菌制剂GMP实施指南》提供胰酪胨大豆肉汤培养基做上述试验，适用于培养基模拟灌装试验。 7.2胰酪胨大豆肉汤培养基灵敏度检查

本次试验均采用同批号的培养基，根据培养基的正确配制方法进行配制，按照《中国药典》2010年版二部附录中无菌检查法中的培养基灵敏度检查。

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7.2.1菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0种），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。

金黄色葡萄球菌〔CMMCC（B）26003〕 铜绿假单胞菌 〔CMMCC（B）10104〕 枯草芽孢杆菌 〔CMCC （B）63501〕 生孢梭菌 〔CMCC （B）64941〕 白色念珠菌 〔CMCC （F）98001〕 黑曲霉菌 〔CMCC （F）98003〕 本地菌（沉降菌）

7.2.2菌液制备：接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、本地菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，23～28℃培养24～48小时，接种本地菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，23～28℃培养24～48小时，上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100CFU的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100CFU的孢子悬液。

7.2.3培养基接种：取每管装量为12ml的胰酪胨大豆肉汤培养基11支，分别接种1ml小于100 CFU的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、本地菌（沉降菌）各2支、另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的胰酪胨大豆肉汤培养基5支，分别接种1ml小于100CFU的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。

7.2.4结果判断：空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。

7.3培养基微生物生长性试验

每一批的培养基在使用前都要做微生物的生长性试验，以确认用于实验的培养基的性能。 7.3.1操作方法：按标准操作规程制备胰酪胨大豆肉汤培养基并灭菌，将灭菌后的培养基分装于20支无菌试管中，在10支试管中接种枯草杆菌，接种量小于100CFU；在另10支试管中接种白色念

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珠菌，接种量小于100CFU；接种后盖塞、封口并分别在30-35℃和20-25℃培养7天。

7.3.2 合格标准：7天内至少50%以上接种的各试管的胰酪胨大豆肉汤培养基中应出现明显的所接种的微生物的生长。 7.4 培养基无菌性试验

每一批除菌后的培养基均要做无菌性试验，以确定培养基的无菌性，防止出现假阳性的结果。培养基模拟灌装试验的结果受培养基无菌性的影响很大，若不能保证培养基在模拟灌装试验前的无菌性，则不能保证试验结果的可信性。证明培养基的无菌性之后进行模拟灌装的方法，以排除培养基无菌性对此项试验的影响，从而确认模拟灌装试验中污染来源于灌装过程。

7.4.1操作方法：将除菌过滤后用于模拟灌装的培养基灌装于50ml无菌试管中，盖塞、封口后在相应温度下培养7天。

7.4.2合格标准：7天内各试管胰酪胨大豆肉汤培养基中应无任何微生物生长。若发现有污染，应明确记录编号、数量，同时检查试管。

7.5 影响培养基生长对试样结果不利的风险分析

培养基灌装实验，要求培养基在最适合的条件下进行，要防止由于操作条件等原因抑制微生物生长，从而降低实验的可信度，对培养基微生物抑制风险评估如下：

抑菌影响分析——物料准备、储存过程

风险点 解 释 控制方法 配制溶液的注射用水高温会抑制微生物将配制培养基的注射用水冷却到室温，在室温度高于70℃ 生长 温下（20-25℃）配制 正常生产溶液PH值偏酸性或碱性环境不培养基的PH调整到适合微生物生长的范围 高或偏低 利于微生物生长 配制好的溶液在低温低温会抑制微生物培养基在储存容器中常温保存 下保存 生长

抑菌影响分析——灌装 风险点 解 释 控制方法

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