生化练习题0912_答案(7)

所融合的蛋白分子之间是否存在相互作用可以依赖下游报告基因表达与否予以确定。酵母双杂交技术可以用于分析已知蛋白之间的相互作用、筛选未知相互作用蛋白、对蛋白质功能域的分析等等。

电泳迁移率变动测定：利用蛋白质的结合增大特定寡核苷酸探针分子量，在凝胶中的电泳速度将慢于游离探针，即表现为条带相对滞后这一现象，分析某种蛋白质是否特定的DNA片段结合的技术。

染色质免疫沉淀法：在活细胞中用化学交联试剂固定蛋白质-DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质的小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合物，再利用PCR技术特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息的技术。 基因治疗：是指将目的基因导入人体细胞，使其发挥生物学效应，从而达到治疗疾病目的的技术方法。

核酸疫苗:也称基因疫苗（gene vaccine），是以编码保护性抗原的基因制成的疫苗。 直接体内疗法：即将外源基因直接导入体内有关的组织器官，使其进入相应的细胞并进行表达。

间接体内疗法：即在体外将外源基因导入靶细胞内，再将这种基因修饰过的细胞回输病人体内，使带有外源基因的细胞在体内表达相应产物，已达到治疗目的。

基因诊断：用分子生物学技术针对DNA和（或）mRNA进行定性、定量分析，通过分析这些遗传信息分子的序列，从而在分子水平上确定疾病的病因，具高度特异性。 问答题：

1.简述基因治疗的策略和基本程序。

基因治疗的策略包括基因矫正、基因置换、基因替代、基因失活、免疫调节等。基因治疗的一般程序包括：①选择治疗基因；②选择基因治疗的靶细胞；③将治疗性基因导入细胞；④外源基因的筛检；⑤将外源基因导入体内。 2.试述基因诊断的特点及基本要求。

基因诊断的特点为特异性高、灵敏度高、稳定性高、诊断范围广、适用性强、临床应用前景好。常用技术包括：①核酸分子杂交技术，其方法主要有斑点印迹、Southern印迹、Northern印迹等。②DNA限制性片段多态性（RFLP）分析；③PCR技术；④DNA芯片；⑤基因测序。

3.可以用于细胞内某种特定mRNA定性定量分析的方法有哪些？各有什么优缺点？ 目前可以用于细胞内某种特定mRNA的常用检测方法有原位杂交、点杂交、Northern印迹杂交及定量和半定量RT-PCR反应等。Northern印迹杂交的优点是可以较准确定性定量特定的mRNA，缺点是难以检测低丰度的mRNA，且需使用放射性核素、操作繁琐；原位杂交的优点是可以在组织中确定表达特定mRNA的细胞类型，与PCR技术的结合又部分解决了检测的敏感性问题，缺点是操作复杂；点杂交的优点是操作简便，但是特异性和敏感性不足；

RT-PCR方法的有点是敏感性高，缺点是由于PCR反应产物的量是以指数形式增加的，最初很小的含量差异，在最终产物阶段将会被放大很多倍，带来较大的实验误差，新的定量PCR分析技术—实时PCR分析技术可以部分克服这一缺点。 4.简述PCR技术的基本原理和主要用途。

PCR的基本工作原理是以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5’末端和3’末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。PCR技术可以用于目的基因的克隆，基因的体外突变、DNA和RNA的微量分析、DNA序列测定和基因突变分析等方面。在PCR技术基础上发展了一些特殊的PCR技术扩大了PCR技术的适用范围，如将RNA的反转录反应和PCR反应联合应用形成的反转录PCR技术、在组织切片或细胞涂片上的单个细胞内进行PCR反应后结合原位杂交的的原位PCR技术等等。实时PCR技术实现了PCR反应从定性到定量的飞跃，目前已在特定mRNA定量分析中逐步得到广泛的应用。 5.生物芯片的含义是什么？与传统生物技术相比有哪些优势？

生物芯片技术是在20世纪末发展起来的一项新的规模化生物信息分析技术，包括基因芯片和蛋白芯片。基因芯片技术是将许多特定的DNA片段或cDNA片段作为探针，有规律地紧密排列固定于单位面积的支持物上，用于检测样品中具有相同或相似序列的核酸分子。蛋白质芯片技术是将高度密集排列的蛋白分子作为探针点阵固定在固相支持物上，捕获样品中的靶蛋白，再经检测系统对靶蛋白进行定性和定量分析。与传统生物技术相比，生物芯片具有分析规模大（高通量）、自动化程度高、快速简便等优势。 6.简述遗传修饰动物模型的种类和在医学方面的主要用途。

遗传修饰动物模型主要包括基因转移和基因剔除等两大类。主要应用的动物是小鼠。基因转移技术和基因剔除技术在探讨每一种基因的产物的正常功能功能方面具有重要的作用。这两项技术在医学中的最重要的用途是建立疾病的动物模型，这些动物模型可以用于探讨疾病的发生机制，更为重要的是可以作为新的治疗方法和新的药物的筛选系统。 7.简述基因组文库和cDNA文库的含义和用途。

基因组DNA文库是指包含某一个生物细胞全部基因组DNA序列的克隆群体，它以DNA片段的形式储存着某一生物的全部基因组DNA（包括所有的编码区和非编码区）信息。cDNA文库是包含某一组织细胞在一定条件下所表达的全部mRNA经反转录而合成的cDNA序列的克隆群体，它以cDNA片段的形式储存着该组织细胞的基因表达信息。从基因组文库中可以筛选到含有所需要的基因的基因组序列的克隆；从cDNA文库中可以筛选到含有所需要的特定mRNA的cDNA序列的克隆。获得的基因组序列和cDNA序列可以用于进一步的分析和改造。

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