生化练习题0912_答案(4)

③柯斯质粒（cosmid或粘粒）：COS序列与质粒载体结合的产物，可以作为克隆大片段基因组DNA的一种载体。

④M13mp系列：一种丝状双链的噬菌体，侵犯宿主菌后借助宿主的酶系统把单链DNA复制成双链DNA，此双链DNA称为复制型。 ⑤动物病毒：可以被导入真核细胞，混合型病毒既可以转染原核细胞，又可以转染真核细胞。 ⑥酵母人工染色体：具有真核生物染色体特点，可以克隆很大的外源片段和表达真核生物的基因。

6.什么是基因载体？哪些DNA可作为基因的载体？

载体即基因载体，或克隆载体，是在基因工程中为携带感兴趣的外源DNA，实现外源DNA的无性繁殖或者表达有意义的蛋白质而采用的一些DNA分子，具有自我复制和表达的功能。其中，为使插入的外源DNA序列可以转录、进而翻译成多肽链而特意设计的克隆载体又称为表达载体。克隆载体有质粒DNA、噬菌体DNA和病毒DNA，它们经适当改造后仍具有自我复制的能力，或兼有表达外源基因的能力; 7. 什么是质粒？为什么质粒可作为基因载体？

质粒是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。分子本身有复制功能的遗传结构，能在宿主细胞内独立自主的进行复制，并在细胞分裂时恒定的传给子代细胞。质粒带有某些遗传信息，因此会赋予宿主细胞一些遗传性状。因质粒DNA有自我复制功能及携带遗传信息、具有表达功能、选择标志基因等特性，可作为重组DNA操作的载体。 8. 简述α互补的原理。

许多载体（如PUC系列）带有一段大肠杆菌的DNA片段，为β-半乳糖苷酶（LacZ）的调控序列和N端16个氨基酸的编码序列（编码LacZ的α肽）。某些特定的宿主菌可表达LacZ的C端（即ω肽）。单独存在的α肽和ω肽都没有活性，但当它们同时在宿主细胞表达时，可互补产生LacZ的活性，将底物X-gal水解，形成蓝色化合物，这种现象称为α互补。

9. 试述E.coli 和真核表达体系的优缺点。

原核表达体系如E.coli为当前采用最多的原核表达体系，优点是培养方法简单、迅速、经济而又适合大规模的生产工艺；不足之处为只能表达克隆的cDNA，不适合表达真核生物的基因组DNA（即含有内含子的DNA）；表达的真核蛋白质不能形成适当的折叠或进行糖基化修饰；表达的蛋白质经常形成不溶性的包涵体，欲使其具有活性还需要进行复杂的复行处理；故很难用E.coli表达体系表达大量的可溶性蛋白。真核表达体系如酵母、昆虫及哺乳动物细胞的表达体系，特别是哺乳类动物细胞的表达体系，不仅可以表达克隆的cDNA，还可以表达真核基因组DNA；哺乳类细胞表达的蛋白质通常已被适当修饰，因此表达产物已有功能。操作技术较难、耗时较多、不经济是哺乳类动物表达体系的缺点。 10.简述基因位点特异的重组和同源重组的差别。

细菌中，可以通过接合、转化、转导和细胞融合四种方式，在不同DNA分子间发生共价连接，也即基因转移；并通过基因重组以适应随时改变的环境，其中，如外来基因与内在基因部分同源，此基因重组即为同源重组；由整合酶催化，在两个DNA序列的特异位点间发生的整合，称为位点特异性重组。

位点特异性重组需要整合酶、发生在两个DNA序列的特异位点之间；同源重组不需要特异DNA序列，而是依赖两个分子之间序列的相同或类似性，但也需要特异的酶催化。

第十五章 细胞信息转导

? 思考题

1.cAMP能别构调节下列哪种酶？

A.磷脂酶A；B.蛋白激酶A；C.蛋白激酶C；D.蛋白激酶G；E.酪氨酸蛋白激酶 2.G蛋白是指

A.蛋白激酶A；B.鸟氨酸环化酶；C.蛋白激酶G；D.Grb2结合蛋白；E.鸟氨酸结合蛋白 3.PKA磷酸化的底物是

A.蛋白质或酶分子中的谷氨酸/天冬氨酸残基；B.蛋白质或酶分子中的酪氨酸残基； C.蛋白质或酶分子中的丝氨酸/苏氨酸残基；D.蛋白质分子中的精氨酸/组氨酸残基 4.表皮生长因子的信号转导通路与下列哪种物质有关

A.受体型酪氨酸蛋白激酶；B.G蛋白偶联受体；C.腺苷酸环化酶；D.cGMP. 5.不能作为细胞内信号转导第二信使的物质有 A.UMP；B.cGMP；C.IP3；D.Ca2+； 6.霍乱毒素的作用机理是

A.Gsα的ADP核糖化；B. Giα的ADP核糖化；C.Gq的ADP核糖化；D.Gβγ的ADP核糖化；

7.将下述分子按信号传递通路中的先后顺序进行排列，居第三位的是 A.Raf；B.Ras；C.PEK（MAPKK）；D.受体

8.将下述分子按信号传递通路中的先后顺序进行排列，居第四位的是

A.IP3；B.磷脂酶C；C.G蛋白；D.受体.

9.可磷酸化蛋白质上酪氨酸残基的蛋白激酶是

A.蛋白激酶C；B.依赖于cAMP的蛋白激酶；C.依赖于cGMP的蛋白激酶；D.Src蛋白激酶；E.磷酸化酶b激酶

10.能使GTP结合蛋白中的Gs亚基丧失GTP酶活性的是

A.霍乱毒素；B.百日咳毒素；C.白喉毒素；D.抗霉素A；E.鱼藤酮. 11.通过胞内受体发挥作用的激素是

A.肾上腺素；B.甲状腺激素；C.胰高血糖素；D.胰岛素；E.促肾上腺皮质激素. 12.下列哪种酶激活后会直接引起cAMP浓度降低

A.蛋白激酶A；B.蛋白激酶C；C.磷酸二酯酶；D.磷脂酶C；E.蛋白激酶G. 13.下列因素中，与Ras1的是

A.GTP；B.GRB2；C鸟苷酸交换因子；D.鸟苷酸环化酶 14.直接影响细胞内cAMP含量的酶是

A.磷脂酶；B.蛋白激酶A；C.腺苷酸环化酶；D.蛋白激酶C；E.酪氨酸蛋白激酶. 15.A.cAMP；B.cGMP；C.甘油一酯；D.甘油二酯.

（1）能促进蛋白激酶C活性的第二信使是 （2）哪项不是细胞内传递信息的第二信使 16.A.细胞膜受体；B.胞内受体；C.两者都是；D.二者都不是

（1）肾上腺皮质激素是与细胞的何类受体相结合 （2）胰高血糖素是与肝细胞的何类受体相结合

17.能与GTP/GDP结合的蛋白质

A.Ras蛋白；B.Raf蛋白；C.G蛋白；D.Myc蛋白

18.磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C可使磷脂酰肌醇4，5-二磷酸水解产生 A.cAMP；B.cGMP；C.IP3；D.DAG

19.能使蛋白质中酪氨酸残基磷酸化的蛋白激酶是 A.PTK；B.MAPK；C.JAK; D.Ca2+-CaM激酶

20.膜受体酪氨酸蛋白激酶的信息传递途经主要经 A.PKA；B.Ras；C.PLC-PKC；D.PKG 1.A（2005）；2.E（2002）；3.C；4.A；5.A；6.A；7.A；8.A；9.D（1997）Src蛋白激酶可特

异的催化蛋白质上酪氨酸残基磷酸化；10.A（1997）；11.B（2003）通过胞内受体调节的激素有糖皮质激素、盐皮质激素、雄激素、孕激素、雌激素、1，25-（OH）2D3和甲状腺激素等。12.C（2006）；13.D（2007）；14.C（2004）；15.DC（1991）；16.BA；17.AC；18.CD；19.AC；20.BC

? 名词解释 受体：位于细胞膜上或细胞内能特异识别配体并与之结合，进而引起生物学效应的特殊蛋白质，个别是糖脂。膜受体绝大多数是跨膜糖蛋白，其胞外部分负责信号的传导；胞内受体（包括胞浆受体和核受体）为DNA结合蛋白。

SH2结构域：与酪氨酸蛋白激酶src分子中一个结构域结构相类似的一种功能结构域，能识别和结合蛋白分子中磷酸化的酪氨酸及其相邻的3-6个氨基酸残基所构成的特殊模体，即SH2结合位点。具有SH2结合位点的蛋白质可以被具有SH2结构域的蛋白质识别并结合。 G蛋白偶联受体：在结构上均为单体蛋白，有7个跨膜区段，故又名跨膜受体。胞外结构负责结合外源信号，胞内信号与异源三聚体G蛋白相结合而存在。基本的信号转导方式是通过不同的G蛋白影响腺苷酸环化酶、磷脂酶C等效应分子活性，从而改变细胞内第二信使浓度，实现跨膜信息传递。

G蛋白：即鸟苷酸结合蛋白。结合有GDP的G蛋白是非活性形式，而结合有GTP的G蛋白是活性形式。G蛋白一般固有GTP酶活性，可以水解结合的GTP，使分子恢复非活性形式。异源三聚体G蛋白就是一类非常重要的转导七跨膜受体信号的G蛋白。

小G蛋白：即低分子量G蛋白。第一个被发现的分子是Ras，故又称Ras超家族。低分子量G蛋白具有GTP/GDP转换、GTP酶活性等G蛋白的共同特征，是重要的细胞内信号转导分子。

信号转导通路：细胞外信号经由受体在细胞内引起的有序分子变化，信号转导通路由各种信号转导分子相互作用而形成。各种信号转导通路不是孤立存在于细胞中，而是具有广泛的交叉联系。信号转导通路的形成是动态过程，将随着信号的种类和强度而不断变化。 第二信使指激素等细胞外化学信号与靶细胞受体结合后，细胞内迅速发生浓度或分布改变的一大类小分子化合物，如cAMP、cGMP、Ca2+、IP3等。它们作用于蛋白激酶等靶分子，改变其活性，进而改变细胞功能。上述变化实现了对细胞外信号的跨膜转换和传递，因而这些分子被称为第二信使。

蛋白质相互作用结构域：指存在于蛋白质中的一些特殊结构域，如SH2、SH3等。它们可以识别其他蛋白中的一些特殊模体，与之结合并影响其活性、稳定性或亚细胞分布等。现已发现几十种不同的蛋白质相互作用结构域。

衔接蛋白：又名接头蛋白，介导蛋白质信号转导分子之间或蛋白质信号转导分子与脂类分子间相互作用，具有特殊的结构域和结合位点，通过变构效应调节下游分子活性。

钙调蛋白：是一种钙结合蛋白。细胞质中Ca2+浓度低时，钙调蛋白不易结合Ca2+，随着细胞质中Ca2+浓度增高，钙调蛋白可以结合不同数量的Ca2+，形成不同构象的Ca2+/钙调蛋白复合物。钙调蛋白本身无活性，形成Ca2+/钙调蛋白复合物后则具有调节功能。

蛋白激酶：是催化ATP的γ-磷酸基转移到靶蛋白的特定氨基酸残基上的一类酶。业已发现的蛋白激酶主要有蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶和蛋白酪氨酸激酶。蛋白激酶活性受各种第二信使或蛋白分子调节。

? 问答题

1.细胞如何对外源信号产生应答反应？

细胞经由特异性受体接受细胞外信号，细胞内众多分子参与信号转导。主要的细胞内生物化学变化是小分子第二信使浓度和分布变化和蛋白质构象变化。这些变化控制着细胞的代

谢变化、基因转录方式、基因复制及细胞分裂速度等多种行为。

2.列举在G蛋白偶联受体介导的信号转导通路上可能产生信号放大作用的步骤。 受体活化G蛋白、G蛋白活化AC和PLC等效应分子、效应分子催化第二信使的生成、第二信使激活靶蛋白等步骤均有放大效应。

3.细胞膜受体可以分为哪几类？各自的结构和信号转导机制是什么？

细胞膜受体可以分为三大类，离子通道受体、G蛋白偶联受体又名七跨膜受体和酶活性相关受体。与离子通道受体结合的主要是神经递质，介导离子通道的打开和关闭，改变膜通透性，能迅速准确的传递神经冲动，影响G蛋白的胞内段与G蛋白结合存在，通过G蛋白的活化影响腺苷酸环化酶或磷脂酶C等效应分子活性，改变细胞内第二信使浓度，以实现跨膜信息传递；酶活性相关受体均属单跨膜受体，有的自身固有酶活性，有的直接与酶结合，它们的信号转导依赖于酶活性的变化和蛋白质相互作用。

4.列举EGFR介导的EGFR-Ras-MAPK信号通路的主要构成和作用方式。

EGF结合于受体EGFR、EGFR发生二聚体化、受体的激酶被活化并发生酪氨酸的磷酸化、募集衔接分子Grb-2、募集低分子量G蛋白调节分子SOS、SOS活化低分子量G蛋白Ras、RAs活化Raf（MAPKKK）启动MAPK级联活化、MAPK进入细胞核使特定转录因子磷酸化、基因表达改变。

5.列举影响细胞对外源信号应答的因素。

细胞对相应信号的受体数目、细胞内信号转导分子的种类和含量、效应分子的种类和含量决定细胞对外源信号的反应。不同细胞对同样的信号将有不同的反应，同一种细胞在不同时间和不同状态下也将有不同反应。

6.什么是细胞间信息物质？包括哪几类，有什么特点？

细胞间信息物质主要是指细胞分泌的调节靶细胞生命活动的化学物质。根据作用特点分为四类：一是局部化学物质，又名旁分泌信号，不进入血循环，通过扩散作用到达附近的靶细胞发挥作用；二是神经递质又名突触分泌信号，由神经元突触前膜囊泡释放，作用的距离和时间极短；三是内分泌信号，由特殊分化的内分泌细胞释放，通过血循环到达靶细胞，大多数对靶细胞作用时间较长，除细胞分泌释放的化学信号外，相邻细胞表面分子也可以作为细胞间信息物质影响细胞的功能。

7.导致疾病发生信号转导通路异常的原因有哪些？

信号转导分子的基因突变导致其蛋白结构变化；信号转导分子基因表达调控异常；外源物质，如细菌毒素等直接修饰信号转导分子，使其丧失部分或全部功能。

8.细胞信号转导通路复杂性体现在哪些方面？

不严格遵从逐级的信号传递顺序，信号分子可能越级传递信号；相同信号分子可以通过不同途径转导信号；不同信号转导通路可以介导相同的生物学效应；不同信号转导途径形成网络，交互作用，彼此影响。

9.受体作用有哪些特点？

高度专一性、高度亲和力、可饱和性、可逆性、特定的作用模式。 第十六章 血液的生物化学

思考题

1.电泳分离血浆清蛋白（pI=4.9）和球蛋白（pI=6.6）时，为达到分离效果最好应选择电泳缓冲液的pH值是

A.pH6.6；B.pH7.6；C.pH5.9；D.pH4.9

2.将血清蛋白质置于pH8.6缓冲液中进行醋酸纤维薄膜电泳时，可从正极到负极出现下列5条区带，其中排列顺序恰当的是

A.清蛋白，α1，α2，β，γ-球蛋白；B.α1，α2，β，γ-球蛋白；清蛋白；

C. 清蛋白，β，α2，α1，γ-球蛋白；D. β，α1，α2，γ-球蛋白，清蛋白； 3.通常血清中酶活性升高的主要原因是

A.体内代谢降低使酶的降解减少；B.细胞受损使细胞内酶释放入血；C.细胞内外某些酶被激活；D.酶由尿中排出减少；E.在某些器官中制造增加 4.血清与血浆的区别在于血清内无

A.维生素；B.糖类；C.代谢产物；D.纤维蛋白原. 5.正常人血清清蛋白/球蛋白之比值为

A.1.0-1.5；B.0.5-1.5；C.1.5-2.5；D.3.0-3.5；

6.成熟红细胞内由磷酸戊糖途径生成的NADPH的主要作用是

A.维持GSH的正常水平；B.促进脂肪酸的合成；C.使高铁Hb（MHb）还原；D.提供细胞所需能量

7.成熟红细胞中能量主要来源于

A.糖的有氧氧化；B.糖酵解；C.糖异生作用；D.脂肪酸氧化；E.氨基酸分解代谢

8.成熟红细胞中只保存两条对其生存和功能发挥重要作用的代谢途径，其一是糖无氧酵解，其二是

A.DNA合成；B.RNA合成；C.蛋白质合成；D.三羧酸循环；E.磷酸戊糖途径 9.稳定血红蛋白结构，调节血红蛋白带氧功能的是

A.1，3-二磷酸甘油酸；B.2，3-二磷酸甘油酸；C.磷酸二羟丙酮；D.3-磷酸甘油酸 10.下列关于2，3-二磷酸甘油酸（2，3-BPG）的叙述不正确的是

A.其在红细胞中含量高；B.是由1，3-二磷酸甘油酸转变而来；C.2，3-BPG经水解，脱去磷酸后生成3-磷酸甘油酸；D.2，3-BPG是一种高能磷酸化合物；E.它能降低Hb对氧的亲和力；

11.影响红细胞成熟的因素有

A.叶酸；B.维生素B2；C.维生素B12；D.泛酸. 12.ALA合酶的辅酶

A.VitB2；；B. VitB12；C. VitB6；D. VitPP； 13.合成血红素的部位在

A.胞液和微粒体；B.胞液和线粒体；C.线粒体和微粒体；D.胞液和内质网 14.血红素合成的原料为

A.苏氨酸、甘氨酸、天冬氨酸；B.甘氨酸、琥珀酰CoA、Fe2+；C.甘氨酸、辅酶A、Fe2+；D.甘氨酸、天冬氨酸、Fe. 15.铅中毒导致

A.ALA增加；B.血红素增加；C.胆色素原增加；D.尿卟啉增加 16.琥珀酰CoA的代谢去路是

A.氧化成CO2和H2O；B.转变成亚油酸；C.参与酮体氧化；D.合成血红素. 17.A乙酰CoA； B.CO2及H2O；C.胆汁酸；D.铁卟啉；E.胆色素. （1）体内胆固醇代谢的终产物是 （2）体内血红素代谢的终产物是 18.下列不含血红素的物质为

A.过氧化氢酶；B.过氧化物酶；C.细胞色素；D.铁硫蛋白；E.肌红蛋白.

1.C；2.A；3.B（1997）；4.D；5.C；6.A；7.B（1999）； 8.E（1998）； 9.B；10.D（2000）；11.AC（1989）；12.C；13.B；14.B；15.A；16.AC；17.CE（1994）；18.D（1989）；

? 名词解释 急性时相蛋白质：在急性炎症或某种组织损伤时某些血浆蛋白的水平会增高，称其为急性时

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