产胞外蛋白酶菌株的筛选及环境因素对其产酶活性的影响(3)

第２期鲜莹等：产胞外蛋白酶菌株的筛选及环境因素对其产酶活性的影响

表ｌ各菌株所产胞外酶对水体中主要形态氦的转化效果

Ｔａｂ．Ｉ

５５

Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂａｃｔｅｒｉａｌｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｌｅｎｚｙｍｅｓ’Ｓｔｒａｎｓｆｒｏｍｅｆｆｉｄｅｎｃｙ

ｏｎ

ａｌｌｋｉｎｄｓｏｆｎｉｔｒｏｇｅｎ

ｃｏｍｐｏｕｎｄ

与对照组相比，两组加入酶液的混合水样组氨

氮的浓度明显高于对照组，硝酸盐少于对照组，亚

硝酸盐和总氮不明显。加入酶液的混合水样中发生了较高水平的氨化作用，在初始浓度与总氮水平几乎一致的条件下，加人酶液的混合水样组生成了更高含量的无机氨氮。这说明相较于对照组，混合水

样中有更多有机氮被转化为氨氮，加入酶液可以促进水体中有机氮物质的减少。实验结果表明，菌株所产胞外蛋白酶对水体中的有机氮的转化具有催化促进作用，可以用于净化水质。

另外，通过检验ＰＲ０９菌株还具有产胞外碱性

磷酸酶的能力。因此综合各步筛选结果，ＰＲ０９菌

株为目的菌株。２．３菌株鉴定

对ＰＲ０９进行形态学鉴定和生理生化鉴定结果显示，该菌株为革兰氏染色阳性菌，所显示特点和芽孢杆菌的特征一致¨ｌ’１‘７｜，鉴定其为芽孢杆菌属。

表２各菌株鉴定

Ｔａｂ．３

Ｉｄｅｎｔｉｆｙｒｅｓｕｌｔｏｆ

ｅｎｚｙｍｅｓ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａ

注：“＋”表示阳性

温度对ＰＲ０９菌株酶活的影响

各物种所产的蛋白酶在温度和ｐＨ上都有着不同的需求。马宏颖等¨引诱变选育的中性蛋白酶产

生菌ＵＭＮ－２６的最适培养温度为３７℃，最适初始

培养基ｐＨ为６．５。代玉梅等【１９］在沙蚕消化道中筛万方数据

为５０℃，且能耐受６０℃高温；在不同缓冲液中，

其最适ｐＨ有所差异，在Ｔｒｉｓ—ＨＣＬ缓冲体系中最适ｐＨ为８．６，而在硼砂一硼酸缓冲体系中，最适ｐＨ

为７．４。

如图２所示，ＰＲ０９菌株所产的胞外蛋白酶活

性在２７～５７℃区间内趋势变化平缓，而在５７—６７℃区间内，酶活性显著升高，６７℃高温时活性最高。

Ｏ．０６Ｏ．０５

辩０．０４

Ｏ．０２０．Ｏｌ

Ｏ

２７℃

３７℃

４７℃５７℃６７℃

不同温度梯度

图２不同温度培养下胞外蛋白酶吸光度大小的差异

Ｆｉｇ．２

Ｅｆｆｅｃｔｏｆｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ

Ｏｎ

ｔｈｅａｂ￥ｏｒｂａｎｃｅｏｆｄｔｌｚｙｍｅ￥

ｐＨ对ＰＲ０９菌株酶活的影响

在培养条件ｐＨ６～９时，ＰＲ０９蛋白酶的活性较高，在ｐＨ７的培养液中，ＰＲ０９菌株所产的蛋白酶活性达到了最高值（图３）。这说明ＰＲ０９产胞外蛋白酶最适ｐＨ为７，属于中性蛋白酶。

０．０４００．０３５０．０３０

肇ｏ．０２５

喜爱酱：

０．０１０Ｏ．００５

０

：ｌ¨５

６

７

耋８

一．¨

９

ｌＯ

不同ｐＨ梯度

图３

不同ｐＨ下胞外蛋白酶活性吸光度大小的差异

Ｆｉｇ．３

ＥｆｆｅｃｔｏｆｐＨ

Ｏｉｌ

ｔｈｅ

ａｂｓｏｒｂａｎｃｅｏｆｅｎｚｙｍｅｓ

（１）实验筛选出一株产蛋白酶和磷酸酶活性的２．３．２

２．３环境条件对ＰＲ０９菌株酶活的影响

２．３．１

选得到的Ｄ２菌株所产蛋白酶的最适产酶温度为２５℃，最适ｐＨ为７．５。詹莉等ｍ１在研究枯草芽孢

杆菌所产的弹性蛋白酶时发现，该酶最适作用温度

３结论

菌株ＰＲ０９，经鉴定为芽孢杆菌。

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