枯草芽孢杆菌菌种退化及其控制(4)

病害防治

34西　南　林　学　院　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　第20卷

表4　复壮时间对Bacillussubtilis生物量和拮抗效应的影响

时间/d

30

60

PRS5菌株90

1203060

BS-3菌株90

120复壮前已退化PRS5复壮前已退化BS-3

未退化PRS5未退化BS-3

二级发酵的活菌数/mL

1119×1011a3170×1012b4118×1012c4120×1012c122101×1011A2176×1011A3188×1012B6119×1012C121112×10102111×10104115×1012631对R.solani的对Penicilliumspp.的

拮抗效应(48h)/%拮抗效应/%

47.0a

50.0a56.0b56.0b3210A3910B4210B4810C361001042.0a46.0a51.0b50.0b4410A5310B5510B6110C331010对B.cinerea的拮抗效应/%

28.0a35.0b40.5c41.0c5210A5810B6810C6710C2110421010注:,.　　

表5　不同处理方法对Bacillussubtilis回收的影响215污染率/%10-9稀释液处理:B.subtilis退化后只有

在土壤载体中才能较好地恢复活力.因此,

如何高效地从复壮载体土壤中回收“目的菌”是十分重要的问题.表5表明:在灭菌土中,不论何种处理方法,回收时均无污染.而在非灭菌土中,回收时的土壤悬液(10-9)不加热,则污染率较高(PRS5为5516%,BS-3为6616%).如在80℃水浴后再分离,污染率显著下降,且水浴时间以10～15min为宜.

不加热

灭菌土

PRS5

80℃水浴5min80℃水浴10min80℃水浴15min

010

01001001055161616010010000066162010510010

非灭菌土

不加热80℃水浴5min80℃水浴10min80℃水浴15min不加热80℃水浴5min80℃水浴10min80℃水浴15min

不加热

80℃水浴5min80℃水浴10min80℃水浴15min

灭菌土

BS-3

非灭菌土

3　讨论与结论

在微生物变异中,主要的诱变因子是

菌株本身的遗传物质所控制,但环境条件的改变也会影响不同基因型核比例的改变[10],从而引起微生物的变异.本研究显示出不同培养基、不同继代次数对B.subtilis退化产生的影响,在实验室常用的培养基中,以SDAY最适B.subtilis生长,然而两菌株在此培养基上多次继代后,其菌种稳定性存在差异.PRS5菌株在12代继代培养较稳定,而BS-3菌株在16代时尚未发生变异.说明BS-3菌株退化速度慢于PRS5菌株,这种特性可能与遗传有关.

在水果生物防腐研究过程中,筛选出某一拮抗菌及探索出发酵生产工艺后,如出现菌株退化,拮抗效应大幅度下降,从而失去生产性能和应用价值是生防工作者尚需解决的迫切问题.本研究以5种复壮载体为基础,探讨了在不同复壮时间下,上述两菌株在退化后的复壮性能,并确定“灭菌土+1%蛋白胨+1%葡萄糖+015%酵母浸膏”为最适复壮载体.复壮速度,BS-3菌株慢于PRS5菌株,分别为120d和90d.

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