枯草芽孢杆菌菌种退化及其控制(2)

病害防治

32西　南　林　学　院　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　第20卷

15g/L;(4)萨氏葡萄糖酵母浸膏培养基(SDAY),在SDA中加酵母浸膏10g/L;(5)全小麦粉琼

脂培养基(WPA),新鲜全小麦粉(不去麸)50g/L,琼脂15g/L;(6)麦麸琼脂培养基(WBA),麦

麸50g/L,琼脂15g/L;(7)玉米粉琼脂培养基(CMA),玉米粉50g/L,琼脂15g/L.将两菌株在上述培养基中分别连续继代10次培养后,采用朱天辉方法[8]生产二级发酵产物,测定活菌数[9]及对Botrytiscinerea[9],Penicilliumspp.[9],Rhizoctoniasolani[9]的拮抗效应.113　继代次数对菌种稳定性的影响

以上述试验为基础,选择最适培养基SDAY,以不同继代次数的菌种,采用上述方法,测定继代培养次数与菌种退化的关系.114　Bacillussubtilis复壮载体研究

复壮载体物质选用:(1)灭菌土;(2)灭菌土+1+1%葡萄糖0;(3)灭菌小麦粉+蛋白胨1%+1%葡萄糖+015%(4)1%+1%葡萄糖+015%酵母浸膏;(5+%1酵母浸膏.顺,25℃下培养30d后,采用上述.115　以灭菌土+蛋白胨1%+1%葡萄糖+015%酵母浸膏为载体,各退化菌株接入后(25℃培养),每隔30d分离回收目的菌,采用上法测定其复壮效果.116　Bacillussubtilis回收方法

将Bacillussubtilis分别接入灭菌土、非灭菌土中,采用稀释平板法[9]分离回收,土壤稀释分不加热和80℃水浴15min,计算污染率.

2　结果与分析

211　Bacillussubtili退化与培养基种类的关系

两个菌株在7种不同培养基上继代10次后,其活菌数及对病原菌的拮抗效应如表1所示,反映出不同培养基对B.subtilis菌种的稳定性有显著影响,在营养较贫乏的PDA,WPA,WBA,CMA上,菌种退化较严重,在营养较好的PPDA,SDA上次之.从总体上看,两菌株菌种的稳定性及退化趋势基本一致,以营养丰富的SDAY较适合B.subtilis的人工培养,两菌株在此培养基上连续继代10代后,其二级发酵的活菌数对Rhizoctoniasolani,Botrytiscinerea和Penicilliumspp.的拮抗效应未发现明显变化,见表1,4.212　Bacillussubtilis退化与继代培养的关系

在同一种培养基上不同继代培养次数对两菌株的影响如表2所示.两菌株在退化速度上有差异,BS-3菌株相对较慢,在继代16次前较稳定,25代后不再退化,而PRS5菌株退化相对较快,在继代12次前较稳定,2代后不再退化.213　不同载体对B.subtilis复壮的影响

(即处理2)载表3显示:两菌株以“灭菌土+1%蛋白胨+1%葡萄糖+015%酵母浸膏”体复壮效果最好.所以,将此载体作为恢复B.subtilis抗生效应的理想载体.214　复壮时间对B.subtilis生物量和拮抗效应的影响

表4表明:复壮时间与恢复B.subtilis的活力呈正相关,但两菌株的复壮速度在同一载

体上存在显著差异,BS-3菌株较慢,在120d时可恢复到退化前状态,而PRS5菌株在90d时

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