葡萄酒分析检验实验2009年(实验)(3)

③、测定

将馏出物加热至沸(以去除二氧化碳，但沸腾时间不得超出30秒钟) 加2滴酚用氢氧化钠标准溶液滴定至粉红色，30s内不变色即为终点。

④、结果计算

挥发酸（以醋酸计）g/l＝

CNaOH VNaOH 60

V样

五、数据记录及计算 六、实验注意事项

实验七、苹果酸的层析分析

一、实验目的

熟练掌握葡萄酒苹果酸－乳酸发酵的层析监控的方法，学会对层析结果进行分析。 二、实验原理

试样以正丁醇为流动相，在饱和水蒸汽的滤纸上直接单向展开，用溴酚蓝显色，根据有机酸在两相中分配系数的不同将有机酸分离开。 三、实验器材

层析缸、层析滤纸、展开剂、标样、酒样 四、实验步骤

⑴、滤纸的准备：

⑵、将配制好的展开剂装入层析缸内，封严。 ⑶、点样：

在离滤纸下端4～5cm处滴上待分析的样品，每滴样品之间的间距为3～4cm；最中间的一滴为苹果酸标样，用作对照；每滴样品在滤纸上的直径不能超过5mm。将滤纸轻轻放入层析缸内，使滤纸不能触及层析缸的内壁，样品滴亦不能浸入展开剂，然后盖严密封。 ⑷、展开（3~4小时） ⑸、 干燥

展开剂移动到离滤纸顶部1～2cm时，滤纸取出并用夹子固定在一铁丝上进行干燥。在干燥过程中，滤纸的颜色由黄变绿再变蓝，一些黄色斑点就是相应的有机酸。 ⑺、计算出相应酸的Rf值 五、 结果分析

画出层析结果图，并进行分析。 六、 实验注意事项

实验八、直接碘量法测定葡萄酒中游离二氧化硫和总二氧化硫

一、 实验目的

了解葡萄酒中二氧化硫测定的意义，熟练掌握碘量法测定二氧化硫的方法。 二、 实验原理

游离二氧化硫

原理：利用碘可以与二氧化硫发生氧化还原反应的性质，用碘标准溶液作滴定剂，淀粉作指示液，滴定样品中二氧化硫的含量，反应式如下： I2+ SO2+ 2H2O = 2I- +SO2－4 + 4H＋ 总二氧化硫

原理：在碱性条件下，结合态二氧化硫被解离出来，然后再用碘标准溶液滴定，得到样品中结合二氧化硫的含量。 三、 实验器材

碘量瓶、1:3硫酸、碘标液、淀粉指示剂 四、 实验步骤

游离二氧化硫的测定：

⑴、吸取25.0mL 20℃样品 250mL碘量瓶中＋（少量碎冰块）＋1mL淀粉指示液＋5mL硫酸溶液。

⑵、 用碘标准溶液迅速滴定至淡蓝色，保持30s不变即为终点，记下消耗的碘标准溶液(V)，同时作空白试验

总二氧化硫的测定

取25.00mL氢氧化钠溶液于250mL碘量瓶中，再准确吸取25.00mL 20℃样品，并以吸管尖插入氢氧化钠溶液的方式，加入到碘量瓶中，摇匀，盖塞，静置15min后，（再加入少量碎冰块）、1mL淀粉指示液、10mL硫酸溶液，摇匀，用碘标准溶液迅速滴定至淡蓝色，30s内不变即为终点，记下消耗的碘标准溶液的体积(V)。

以水代替样品做空白试验，操作同上。

五、 结果计算

游离二氧化硫（mg/l）X＝

总二氧化硫（mg/l）X＝六、 实验注意事项

C碘液 (V V0) 32

1000

25

C碘液 (V V0) 32

1000

25

实验九 邻啡络林比色法测定葡萄酒中的铁

一、实验目的：

了解测定葡萄酒中铁的意义，熟练掌握邻啡络林比色法测定铁的操作方法。 二、实验原理：

处理后的试样中，三价铁离子在酸性条件下被盐酸羟胺还原成二价铁离子，与邻啡罗啉作用生成红色螯合物，其颜色深浅与铁含量成正比，用分光光度法进行含铁量的测定。其反应式如下：

2Fe3+ + 2NH2OH.HCl →2Fe2+ +N2 +H2O +4H+ +2Cl— Fe2+ + 3 C12H6N2 → ［Fe(C12H6)3］2+

三、实验器材：

紫外可见光分光光度计、凯氏烧瓶、试剂等 四、实验步骤：

①、打开紫外可见光紫外可见光分光光度计电源，预热30min ②、试样的制备

准确吸取1.00mL样品(V)(视含铁量增减)于10mL凯氏烧瓶中，置电炉上缓缓蒸发至近干，取下稍冷后，加1mL浓硫酸(根据含糖量增减)、1mL过氧化氢，于通风厨内加热消化。如果消化液颜色较深，继续滴加过氧化氢溶液，直至消化液无色透明。稍冷，加10mL水微火煮沸3～5min，取下冷却。同时做空白试验。? ③、、铁标准系列的配制

吸取铁标准使用液0.00、 0.20、 0.40、 0.80、 1.00、 1.40mL (含0.0、2.0、4.0、8.0、10.0、14.0μg铁)分别于6支25mL比色管中，补加水至10mL，加5mL乙酸-乙酸钠溶液(调pH至3～5)、1mL盐酸羟胺溶液，摇匀，放置5min后，再加入1mL邻菲口罗啉溶液，然后补加水至刻度，摇匀，放置30min，备用，该系列用于标准工作曲线的绘制。 ④、标线的测定

在480nm波长下，测定标准系列的吸光度。根据吸光度及相对应的铁浓度绘制标准工作曲线(或建立回归方程)。 ⑤、试样测定

试样及空白消化液用氨水中和至试纸显蓝紫色加5mL乙酸-乙酸钠溶液补加水至加1mL盐酸羟胺溶液，摇匀，放置5min后，再加入1mL邻菲罗啉溶液，然后补加水至刻度，摇匀，放置30min，测出的吸光度A，从标准工作曲线上查出酒样中铁的含量(或用回归方程计算)。

五、结果计算：

湿法消化的计算

X （mg/l）=

六、实验注意事项

A A0

V

实验十 考马斯亮蓝G-250比色法测定葡萄酒中的蛋白含量

一、实验目的：

掌握考马斯亮蓝G-250比色法测定葡萄酒中的蛋白含量的方法及操作方法。 二、实验原理；

考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为青色，前者最大光吸收在465nm，后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内(0～1000μg/mL)，蛋白质—色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量分析。 三、实验器材：

紫外可见光分光光度计、白葡萄酒 四、操作步骤：

①、标线的制作

0~100标线和0～1000标线的制作

0～100μg/mL标准曲线溶液配制表

管号 1 2 3 4 5 6 1000μg/mL牛血清白 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10

蛋白原液量(mL)

蒸馏水（ml） 1.0 各管蛋白质含量 0

(μg/mL)

0.98

20 0.96 40 0.94 60 0.92 80 0.90 100

0～1000μg/mL标准曲线溶液配制表

管号

1000μg/mL牛血清白 蛋白原液量(mL)

6 0 7 0.2 0.8 200

8 0.4 0.6 400

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