答：
步骤：1、鼻咽癌细胞系/组织的（全）蛋白质表达谱构建：肿瘤蛋白质组表达谱及其蛋白质组数据库是深入开展肿瘤蛋白质组相关研究的基础。LCM纯化，2DE、MS分离鉴定差异表达蛋白，Western Blot验证，免疫组化验证。
2、鼻咽癌与正常鼻咽上皮的比较蛋白质组学筛选标志物，肿瘤细胞与其起源的正常细胞的比较蛋白质组学研究是发现肿瘤标志物和治疗靶标的最直接和合理的方式之一。为提高肿瘤标志物筛选的准确性，有必要从组织中纯化靶细胞用于蛋白质组学研究。 3、血清蛋白质组学研究
样本收集；分离和鉴定；表达验证；功能验证。
技术：① 经典的2-DE在一定范围内得到应用，能直接比较蛋白质水平的差异。②直接质谱法之色谱-质谱联用：蛋白酶解为多肽，再鉴定和定量这些多肽，即可获得原始蛋白的质和量的信息；包括标记法和非标记法；该操作相对简单；但由于原始蛋白的一些信息会在酶解时丢失 (如蛋白降解)，其结果是不全面的 ③直接MALDI（基质辅助激光解吸电离）／SELDI（表面增强激光解吸电离）,即不酶解，直接进行质谱分析；更适用于高通量研究，但是后续的蛋白质／多肽鉴定往往成为这类实验的瓶颈 ④其它方法：包括基于抗体的方法,如自身抗体、抗体芯片等。如：血清蛋白组学分析：即分别用病人和正常人的血清作为一抗，筛选肿瘤组织中的差异蛋白质，即肿瘤抗原。其实质是 2DE + 免疫印迹技术流程：肿瘤组织或细胞总蛋白—2DE分离—转膜—膜与病人血清及对照血清反应—质谱鉴定差异反应点的蛋白—确定肿瘤抗原。病人血清及对照血清：差异的就是前者有针对肿瘤抗原的抗体 （1）通过蛋白组学技术已经发现的TM（举例）（2）组学技术可提高诊断的敏感性和特异性（3）肿瘤标志物联合检测的必要性。
如童急性淋巴细胞性白血病蛋白标志物的发现和鉴定。先应用SELDI-TOF-MS技术，比较儿童ALL患者血清和健康儿童血清的蛋白质表达谱，寻找患者与健康儿童血清中的差异蛋白，确定潜在的蛋白质生物标志物，然后利用HPLC分离纯化差异蛋白，最后利用MALDI-TOF-MS 及LC-MS／MS鉴定差异蛋白。
1、比较儿童ALL患者血清和健康儿童血清的蛋白质表达谱步骤：样本收集、溶液制备、SELDI—TOF—MS分析、数据分析，寻找患者与健康儿童血清中的差异蛋白。
2、潜在蛋白质生物标志物的分离纯化：血清样品的预处理、潜在生物标志物蛋白的HPLC分离纯化、HPLC分离所得蛋白组分的MALDI-TOF-MS检测。
3、目标蛋白质的LC—MS/MS分析：目标蛋白质的酶解、酶解产物的LC-MS／MS分析、LC-MS／MS分析数据的检索、鉴定结果的lmmu-SELDI—TOF—MS验证。
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