在亚硫酸盐氧化酶存在下,亚硫酸盐被氧化成SO4-及H2O2,在过氧化氢氧化酶的作用下,用色原试剂显色,用光度法测定亚硫酸盐的含量。此法快速,准确,灵敏度高,但需掌握溶液酸度,显色时间,以及酶催化作用中存在的干扰。Edberc U[26]等采用酶催化法,选择烟酰胺腺嘌呤磷酸二核苷酸(NADH)过氧化酶,NADH将H2O2还原成水,并生成NAD+,光度法测量NADH量的减少来测定SO32-的浓度,检出限为1.2mg/ kg。狄伟俊[27]等则是采用3,3ˊ,5,5ˊ-四甲基苯胺(TMB)来代替NADH进行酶光度分析法测定亚硫酸盐,成功地用于食品中痕量亚硫酸盐的测定。 3.1.7其它方法
化学发光法,传感器法,毛细管电泳法,动力学光度法,冷原子吸收光谱法,电感藕合等离子发射光谱法等等,在此不一一详述。 3.2不同国家检测标准
不同的国家对亚硫酸盐的检测采用了不同的方法。我国主要有国标法GB/T5009.34-2003[28]和行标法SN/T0230.1/2-1993[29] [30]。其中国标法GB/T5009.34-2003有两种方法,第一法是盐酸副玫瑰苯胺法,其检测方法原理是属于络合比色法。其检测的对象主要是食品中游离态亚硫酸盐及亚硫酸盐的总量。第二法是蒸馏法,其检测方法的原理是属于蒸馏—碘量法。其检测的对象是食品中亚硫酸盐总量。日本的官方检测方法主要是日本食品协会方法[31],此法分A、B两种,A法的检测原理是属于蒸馏—碱滴定法,其检测的主要对象是食品中游离态亚硫酸盐及亚硫酸盐的总量。B法的检测原理是属于蒸馏比色法,其检测对象主要是食品中亚硫酸盐总量。韩国官方主要采用Monier-Williams改良法[32],该法的检测原理是属于蒸馏—碱
滴定法,检测对象主要是食品中亚硫酸盐总量。英国与欧洲都采用英国标准化学会标准Standard-BS EN 1988-1-1998和Standard-BS EN 1988-2-1998两种方法[33],第一法标准Standard-BS EN 1988-1-1998,其检测原理属于Monier-Williams测试法,检测对象为食品中亚硫酸盐总量。第二法标准 Standard-BS EN 1988-2-1998,其检测原理属于酶催化法,检测对象为食品中亚硫酸盐总量。法国采用法国标准化学会标准Standard NF V03-060-1-1998和Standard NF V03-060-2-1998[34],两种方法。第一法检测原理属于Monier-Williams测试法,检测对象为食品中亚硫酸盐总量。第二法检测原理属于酶催化法,检测对象为食品中亚硫酸盐总量。美国采用美国食品药品管理局标准(AOAC),另外国际上主要采用ISO5522-1981(E)
[35]
标准检测食品中亚硫酸盐的含量,该标准有三种方法,第一法属于蒸馏
—碱滴定法,第二法属于蒸馏比色法,第三法是仲裁法,检测原理属于重量法。此标准的检测对象是食品中亚硫酸盐总量。国际葡萄酒总局[36]针对葡萄酒中游离态亚硫酸盐及亚硫酸盐总量,推出了快速检验方法和常规检验方法两种检验方法,其中,快速检验方法的原理属于直接滴定碘量法,常规检验方法的原理属于蒸馏—碱滴定法。详见表3。
表3 不同国家检测标准
国家 中国 检测方法名称 GB/T5009.34-2003 (1) GB/T5009.34-2003 (2) SN/T0230.1/2-1993 日本 日本食品协会方法(A) 日本食品协会方法(B) 检测方法原理 络合比色法 蒸馏—碘量法 直接滴定碘量法 蒸馏—碱滴定法 蒸馏比色法 检测对象 游离态亚硫酸盐及亚硫酸盐总量 亚硫酸盐总量 游离态亚硫酸盐及亚硫酸盐总量 游离态亚硫酸盐及亚硫酸盐总量 亚硫酸盐总量 韩国 韩国食品医药品安全厅(KFDA)蒸馏—碱滴定法 Monier-Williams改良法 亚硫酸盐总量 英国和欧洲 Standard-BS EN 1988-1-1998 (Monier-Williams测试法) Standard-BS EN 1988-2-1998 蒸馏—碱滴定法 亚硫酸盐总量 酶催化法 蒸馏—碱滴定法 亚硫酸盐总量 法国 Standard NF V03-060-1-1998 (Monier-Williams测试法) Standard NF V03-060-2-1998 酶催化法 极谱法 蒸馏—碱滴定法 重量法 蒸馏—碱滴定法 蒸馏比色法 重量法 直接滴定碘量法 蒸馏—碱滴定法 亚硫酸盐总量 亚硫酸盐总量 亚硫酸盐总量 亚硫酸盐总量 亚硫酸盐总量 亚硫酸盐总量 亚硫酸盐总量 游离态亚硫酸盐及亚硫酸盐总量 游离态亚硫酸盐及亚硫酸盐总量 美国 AOAC 987.04 AOAC 961.09 AOAC 961.09 国际检 测机构 ISO5522-1981(E)(1) ISO5522-1981(E)(2) ISO5522-1981(E)仲裁法 国际葡萄酒总局 国际葡萄酒总局快速检测方法 国际葡萄酒总局常规检测方法 4 小结
随着人们生活水平的不断提高,科技的不断进步,人们逐渐认识到食品添加剂亚硫酸盐对人体造成的巨大伤害。各国也对食品添加剂亚硫酸盐的限量更加严格。但由于亚硫酸盐是一些食品制作和保存过程中必不可少的因素(例如葡萄酒、啤酒、淀粉类食品),所以对于亚硫酸盐的检测就显得尤为重要。由于亚硫酸盐在食品领域应用的十分广泛,各种样品的特点不同,对于一些特殊样品,一些常规检测方法不能很好的应用,检测者应该根据各自实验室的条件及水平,根据各种检验方法的优缺点,灵活运用,选择适合的检测方法。
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