植物组织培养开题报告范文(2)

⑤每瓶定容500ml ⑥调PH(5.8~6.0) ⑦包扎后高温灭菌，待凝固后备用 B.外植体的清洗和消毒：用小刷在流动的自来水下洗刷胡萝卜,除去表面的屑粒。用小刀给其削去表皮，并切成小段放入烧杯中。先用75%酒精对胡萝卜直根消毒5min，用无菌吸水纸吸干，再用10%的次氯酸钙溶液消毒10min，放入无菌水中漂洗2～3次，用无菌吸水纸吸干待用。 C.接种：在无菌操作台上操作，把消毒好的胡萝卜直根放入无菌培养皿中，用消毒好的小刀沿截面将其横切成厚度1mm左右的小圆片，然后将小圆片的韧皮部和木质部切去，留下形成层，再将形成层切成大约长5mm、宽5mm、高1mm的小长块。将凝固的培养基融化后适量倒入6个培养皿，用镊子将切好的胡萝卜外植体接种在固体培养基上，每个培养皿5块，按上表放入6个培养皿中，表上编号。放于黑暗处25℃条件下进行暗培养。 D.培养：接种后的培养皿放在无菌箱里培养,培养期间定期更换培养基,避免营养不足影响效果。并且要定期消毒,严格控制温度,定时光照,使实验免受无关变量影响。注意观察记录外植体的变化，是否有污染或诱导出愈伤组织。 （3）实验注意事项： A.防火。实验中要经常用酒精消毒、用酒精灯烧镊子、刀具，注意安全。 B.无菌操作。超净工作台的消毒，在工作台内部所用仪器的消毒以及工作台面上的用品要有合理的布局。手要用酒精擦干净；镊子和刀经常在火焰上烧；锥形瓶、手不要放在盛材料的培养皿上方。 C.材料处理。材料不易切得过小，消毒时间不易过长。切取外植体时尽量取胡萝卜的形成层进行接种，形成层相对木质部和韧皮部较容易诱导出愈伤组织,而且要把胡萝卜的消毒接触部位切除干净。 D.培养基配制。按实际配制含量准确吸取母液，PH的调节（PH计的正确

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操作）都是制备MS培养基的重要操作。要先灭菌再凝固。 （4）实验可能遇到的困难： A.实验过程中所需要用到的实验用具以及培养基没有经过严格的灭菌，实验污染导致实验失败。 B.培养基中植物生长激素的浓度不对，导致出愈率低。 7

4、论文计划及进度： 理论日程(可参考) 实验事项 分离胡萝卜直根的新鲜外植体及接种进入培养基 愈伤组织的显著增殖 约两周后，观察并计算胡萝卜的诱导率 时 间 第1天 约14天 实验号 基本培养基 2,4-DKT （mg/L） （mg/L） 0 0 1 1 2 4 0 0.5 0 0.5 1.5 2.5 诱导率（%） 1 2 3 4 5 6 MS MS MS MS MS MS 期间作如下记录简表: 记录人: 温度: 湿度: 日光照时间: 记录项目 日期 培养物数目 肉眼观测形态变化 污染物数目 所作处理 备注

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5、主要参考文献： [1]张娅,曾君祉,周志勇,等.胡萝卜组织培养和高效遗传转化体系的建立[J].植物学通报,2005,22(增刊):7-42. [2]郑回勇,郑金贵,等.胡萝卜再生体系及高效遗传转化体系的建立[J].广西农业科学,2002(5):237-241. [3]尹文兵,李丽娟,黄勤妮,李艳红.胡萝卜愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养研究[J].山西师范大学学报，2004(2):72-76. [4]高金秋,于丽杰.胡萝卜体细胞胚再生系统的建立[J].北方园艺,2009(8):73-77. [5]杨宁,郭勇.胡萝卜细胞培养产生胡萝卜素的研究[J].广西植物,1999,19(1),84-88 [6]胡蓉.胡萝卜愈伤组织建立中的几个问题探讨[J].川北教育学院学报：自然科学版，1995(2):7,16. [7]陈淑仪.诱导胡萝卜愈伤组织实验的探究.教学仪器与实验，2007:12-13. .

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开题报告概况（包括单位、地点、出席人数及对论文工作计划提出的意见和建议）：

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指导教师意见： 签名： 年 月 日 指导组召集人意见： 签名： 年 月 日

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