浮游菌测试操作规程

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山东良福制药有限公司 起草人 审核人 批准人 实施日期 日 期 日 期 日 期 总页数 共7页 152425368 第版 1. 主题内容和适用范围

本规程规定了公司洁净室（区）中浮游菌的测试条件，测试方法及控制标准。 本规程适用于公司洁净室（区）浮游菌的测定和洁净度等级的验证。 2. 相关文件

《药品生产质量管理规范》 2010年版 《医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法》 GB/T16293—2010 3. 术语

3.1 洁净室（区）

对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、装备及其使用，均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。 3.2 洁净工作台

一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台、自净器等。 3.3 菌落

细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。通常用个数表示。 3.4 浮游菌

用本规程提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。 3.5 浮游菌浓度

单位体积空气中含浮游菌菌落的多少，以计数浓度表示，单位是个/m3或个/L 。 3.6 静态测试

洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。 3.7 动态测试

洁净室(区)已处于正常生产壮态下进行的测试。

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4. 职责

中心化验室微生物限度检查室人员负责浮游菌的定期检测工作。 5. 质量标准

5.1 环境菌落监测标准 区域 内容 标准cfu/平皿 警戒限度cfu/平皿 测定频次 说 明 6. 材料与设备 6.1 设备

浮游菌采样器、净化工作台、恒温培养箱、烘箱、高压蒸汽灭菌器、放大镜、显微镜、电冰箱、

菌落计数器。 6.2 用具

培养皿（平皿）：?90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。钢精锅：10000ml。三角瓶：300ml。天平、称样纸、勺。此外还需要棉塞、牛皮纸、线绳、微波炉、玻璃棒、海棉擦、毛刷等用具。 6.3 空白培养皿的准备 6.3.1 包扎

取洁净、干燥的培养皿用牛皮纸或专用包皮布包严扎紧待灭。 6.3.2 灭菌

灭菌采用湿热灭菌法。条件：0.12Mpa、121℃，20min。灭菌时要注意按照操作规程操作高压蒸汽灭菌器。 6.3.3 传输

将灭菌并用余热烘干后的平皿，传至准备间，并用紫外线照射备用。空白平皿一般在注皿前24小时内灭菌，传入。 6.3.4 质量要求

已备好待用的平皿应确保无损、无污、无菌、干燥。 6.4 培养基的准备及灭菌

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D级洁净区 ≤200 160 1次/季 万级洁净区 平均≤100 2 1次/日 百级洁净区 平均≤1 --------- 1次/班 D级区平皿菌落数平均不得超过200个。

6.4.1 大豆酪蛋白琼脂培养基制备。

取大豆酪蛋白琼脂培养基约34g，加蒸镏水1000ml加热溶解即得。 6.4.2 溶解与分装

培养基配制好后，分装入洁净干燥的300ml三角瓶内，约200ml/瓶，并塞好棉塞，扎上牛皮纸帽，待灭。 6.4.3 培养基的灭菌

采用湿热灭菌法。除另有规定外，条件0.12MPa，121℃，20分钟。注意：灭菌结束后自然降压，以防培养基在突然降压后沸腾。 6.5 注皿

6.5.1 无菌室应整洁、有序，各用具处于定置状态。

6.5.2 注皿前对无菌室作适当消毒和清洁，并开紫外线照射30分钟。

6.5.3 把准备好的空白平皿去掉牛皮纸，放在工作台上，按每若干个为一组摞齐摆好。 6.5.4 灭菌的培养基，加热溶化传入无菌室，用75%酒精擦试瓶体后，放在工作台上，

打开紫外线照射，待其冷至45℃左右时，开始注皿。 6.6 注皿操作

6.6.1 操作员消毒手，做房间和工作台环境皿。

6.6.2 操作员在符合100级空气洁净度条件的层流净化工作台上将培养基注入培养皿。

注入量：?90mm培养皿15ml。注皿时，三角瓶倾斜，把皿盖微微打开（不超过45O角），将培养基注入皿中，动作尽量快、稳、轻。

6.6.3 将注好的平皿，每若干个为一摞排放整齐，用浸有75%酒精的绸布盖上，打开紫

外灯照射待凝。

6.6.4 凝固后，平板倒过来，收入筐内，包好，放培养箱中预培养，30～35℃，48小时，

看培养基本身是否染菌。

6.6.5 质量要求：制备好的培养皿（基），经48小时培养后，无菌生长方可进入待用状

态。若长菌培养皿大于该全部培养皿的10%，视为该批培养基不合格。应倒掉重新配制。 6.7 用具的洗涤

6.7.1 用后培养皿的清洗

使用后，先用海棉擦沾水和洗衣粉擦去皿盖上的记号，然后铲出培养基，用海棉擦或毛刷蘸洗涤剂在温水中洗干净，用自来水冲四、五次，再用蒸镏水冲洗2～3次，烘干，备用。

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6.7.2 用后三角瓶和钢精锅的清洗。

使用后，先用热水烫洗1～2次，然后用毛刷蘸洗涤剂刷洗干净，用自来水冲四、五次，再用蒸镏水冲洗2～3次，晾干，备用。 7. 测试方法 7.1 测试方法

本测试方法通过带浮游微生物空气高速通过微孔，被均匀撞击在培养皿内的琼脂表面；这些活体微生物在琼脂表面获得均匀和充分，在培养过程中，快速发生动态再水化过程，高速生长，从而更快得出结果。在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。

7.2 培养皿选用?90mm 型 7.3 采样点的布置

培养皿应布置在具有代表性且气流扰动极小的地方。

采样点位置的详细规则见附件一

A.1 洁净室（区）采样点布置宜力求均匀，避免采样点在局部区域过于稀疏。

下列多点采样的采样点布置图示可作参考。（见图A.1）

图A.1 平面采样点布置图

A.2 100级单向流区域，洁净工作台或局部空气净化设施的采样点宜布置在正对气

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流方向的工作面上，气流形式可参考以下图A.2、图A.3。

图A.2 水平单向流气流形式

图A.3 垂直单向流气流形式

7.4 最少采样点数目参见5.4.1.1采样点一般在工作面上0.2m高度的平面上均匀布置。

最少采样点数目

浮游菌的最少采样点数目可按表一确定。

表一 最少采样点数目 面积m2 <10 ≥10~<20 ≥20~<40 ≥40~<100 ≥100~<200 ≥200~<400 ≥400~<1000 ≥1000~<2000 ≥2000 100 2~3 4 8 16 40 80 160 400 800 洁净度级别 10000 100000 2 2 2 2 2 2 4 2 10 3 20 6 40 13 100 200 32 63 300000 2 2 2 2 3 6 13 32 63 注：对于100级的单向流洁净室（区），包括100级洁净工作台（bench），面积指的是送风口表面积；对于10000级以上的非单向流洁净室（区），面积指的是房间面积。

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