生理学实验(4)

高效价的A型血和B型血制作的血清，利用A型标准血清(含抗B抗体，即抗B凝集素)和B型标准血清(含抗A抗体，即抗A凝集素)分别与受试者的红细胞混合，观察有无红细胞凝集现象，即可判定红细胞膜上所含的凝集原，从而确定其血型。在血型确定后，临床输血时尚需将同型血进行交叉配血，如无凝集现象，才能进行输血。

交叉配血试验是将供血者的红细胞与受血者的血清混合(称为交叉配血试验的主侧)，再将供血者的血清和受血者的红细胞混合(称为交叉配血试验的次侧) 。若主侧、次侧均无凝集，称完全配合，可安全输血。如主侧不凝，次侧凝，有条件时最好换一个血再作交叉配血，无条件换血则只能少量、缓慢输血。如主侧凝集，则绝对不能输血。 【实验对象】 人。

【器材和药品】 消毒采血针、注射器及针头、消毒棉签、消毒棉球、玻片、小试管、牙签、离心机、蜡笔、显微镜、碘酒、75%酒精、生理盐水、A型及B型标准血清、滴管。

【操作步骤和观察项目】 (一)ABO血型鉴定

(1)取A型、B型标准血清各1滴，分别滴在玻片的两端，分别标明A和B。 (2)用75%酒精棉球消毒耳垂或指尖，用消毒采血针刺破皮肤，取1～2滴血于盛有lml生理盐水的小试管中混匀，制成红细胞悬液，然后用消毒干棉球堵住针孔以防继续出血。

(3)用滴管吸取红细胞悬液，分别滴一滴于玻片上的血清中，注意勿使滴管尖端和血清相接触，用二支牙签分别混匀。(如出血量少，亦可分别用二支牙签将血直接刮下，与玻片上的血清混匀。注意已经接触过血清的牙签不得再接触伤口血液。)

(4)10min后，用肉眼观察有无红细胞凝集反应，如无凝集反应，再用清洁牙签混合。30min后，再在显微镜低倍镜下观察，根据凝集情况确定被检查者血型。

图5-14 ABO血型检查结果示意图 (二)交叉配血 1．玻片法

(1)选取二名ABO血型相同的受试者，确定一名为受血者，一名为供血者。 (2)碘酒、酒精消毒皮肤，用消毒的干燥注射器分别抽取供血者、

受血者静脉血各2ml，将其中1～2滴加入

装有lml生理盐水的小试管中制成红细胞悬液，其余血液装入另一小试管中，待其凝固后离心析出血清备用。在试管上标上供血者、受血者标记。

(3)在玻片两端分别标上“主”、“次”字样，在主侧分别加上供血者红细胞悬液和受血者血清各1滴，在次侧分别滴加供血者血清和受血者红细胞悬液各1滴，分别用牙签混合。15min后观察结果，如两侧均无凝集表示配血相合。 2．试管法 取试管2支，分别标上“主”、“次”字样，按玻片法加入相应内容，混匀后离心1min(1 000r/min)，取出观察结果。 【注意事项】

(1)标准血清的瓶盖切勿盖错，吸红细胞悬液的滴管切勿混用，搅拌用的牙签，用后即弃，不得互相污染或混淆使用。

(2)红细胞悬液和标准血清须新鲜，否则易出现假阳性反应(凝集)。 (3)红细胞悬液不能太淡，否则可出现假阴性反应。 (4)凝集出现时间长短与红细胞膜上凝集原数量有关，例如与基因组合状况有关，同是A型，但基因型的AA型比AO型的A型凝集原多，因而凝集现象出现快。肉眼难以辨别凝集的应在显微镜下观察。 【思考题】

（1）如无标准血清，仅知某人的血型是A型或B型，可否利用这一条件鉴定一未知血型?

（2）为什么在血型相同的人之间进行输血，也要进行交叉配血试验? （3）同一个供血者和受血者，第二次输血时还要作交叉配血试验吗?

三、循 环

实验15 蛙心起搏点分析

【实验目的】 通过结扎阻断窦-房兴奋传导或房-室兴奋传导，观察蛙心起搏点和心脏不同部位自律细胞自律性高低，以及温度对它们的影响。

【实验原理】 心脏的特殊传导系统具有自律性，不同部位的自律细胞自律性不同。哺乳类动物窦房结自律性最高，房室交界次之，心肌传导细胞最低。窦房结主导整个心脏的节律性兴奋和收缩，称为正常起搏点。两栖类动物心脏的正常起搏点是静脉窦，由于两栖类心脏对 环境的要求低，故常选作实验动物。 【实验对象】 蟾蜍（或蛙）。

【器材和药品】 蛙类手术器械一套(见实验1)、蛙心夹、小试管、试管夹、酒精灯、水温温度计、滴管、任氏液。 【操作步骤和观察项目】

(1)取蛙一只，用探针破坏脑和骨髓，仰位固定在蛙板上。用粗剪刀剪开胸部皮肤并沿中线剪开胸骨，将胸骨向两侧牵拉，充分暴露心包和心脏。

(2)用眼科剪剪开心包膜，暴露心脏，识别左、右心房、心室、动脉圆锥、主动脉干。

(3)用玻璃分针将心脏向上翻转，在背面可见搏动的静脉窦、心房和心室。注意在静脉窦与心房交界处有一半月形白线，即窦房沟。

图5-15 蟾蜍的心脏结构示意图

(4)观察静脉窦和心房、心室的跳动，并计数其跳动次数。

(5)用盛有35～40℃热水的小试管分别依次接触心室、心房和静脉窦以提高它们的温度，同时分别观察记录心跳频率的变化。

(6)在静脉窦和心房之间穿一丝线，在窦房沟部结扎以阻断窦-房传导，观察心房和心室跳动是否暂时停止?待心房和心室恢复跳动后，静脉窦、心房和心室跳动频率有何变化?

(7)在房室沟处穿一丝线，将房室沟结扎，以阻断房-室兴奋传导，观察心室是否暂时停止跳动，待心室恢复跳动后，分别记录静脉窦、心房、心室的跳动频率。由此得出结论，心脏的起搏点位于何处? 【注意事项】

(1)破坏中枢应彻底，防止上肢肌紧张，影响暴露视野。 (2)剪开心包应仔细，勿伤及心脏和大血管。 (3)实验中随时用任氏液润湿心脏表面。

(4)局部加温时温度不宜过高，以防损伤心肌。

(5)沿静脉窦边缘结扎时，扎线应尽量靠近心房端，以免损伤静脉窦或将部分静脉窦残留，影响实验结果。

(6)结扎后如心房和心室停跳时间过长，可用玻璃分针给心房和心室一机械刺激，或对心

房、心室加温，促进心房和心室恢复跳动。 【思考题】

（1）根据蛙心静脉窦、心房、心室三者的不同收缩频率，可说明蛙心起搏点位于何处?

（2）为什么在刚结扎的时候，结扎下方的部分停止收缩，而后又会重新恢复跳动?

实验16 期前收缩与代偿间歇

【实验目的】 学习记录在体蛙心心跳曲线(心肌收缩曲线)的方法，观察在心肌收缩的不同时期给心脏以额外刺激后的反应，以了解心肌兴奋性变化的特征。 【实验原理】 心肌每发生一次兴奋后，其兴奋性会发生一系列周期性变化。与其他可兴奋组织相比，其特点是有效不应期特别长，几乎相当于整个收缩期和舒张早期。因此，在心肌的收缩期及舒张早期给予任何强大的外加刺激都不能引起心肌兴奋和收缩。心肌的相对不应期在其舒张中期，在此期给心脏一个较强刺激，可引起一个提前出现的兴奋和收缩，称期前兴奋和期前收缩。期前兴奋也有一个有效不应期。随后到达的正常起搏点的兴奋(窦性兴奋)往往正好落在期前兴奋的有效不应期内，因而不能引起心室肌兴奋和收缩，必须等到下一次正常起搏点的兴奋传来时才发生兴奋。因而在一次期前收缩之后，往往有段较长的心脏舒张期，称为代偿间歇。

【实验对象】 蟾蜍(或蛙)。

【器材和药品】 蛙类手术器械（见实验1）、张力换能器、刺激输出线、万能支架、连有细线和焊有漆包线的蛙心夹、双凹夹、任氏液。 【操作步骤和观察项目】

(1)破坏蟾蜍的脑和脊髓，用大头针背位固定四肢于蛙板。

(2)自剑突两侧下颌角方向剪开胸部皮肤，用镊子提起胸骨，剪开两侧肌肉，再伸入胸腔，剪去胸骨，注意勿伤及心脏、血管。用镊子提起心包膜，剪开心包膜暴露心脏。

(3)将连有细线和焊有漆包线的蛙心夹在心舒期夹住蛙心尖少许。

(4)将蛙心夹上细线连在张力换能器的受力片上。上移换能器，使线绷垂直，观察张力换能器上受力片轻微移动（图5-16）。张力换能器的插头插入1通道插孔。

图5-16 期前收缩装置

(5)打开多媒体生物信号记录分析系统。 初次实验可直接进入“实验模块”中。 ① 选择实验模块中期前收缩和代偿间歇 ②刺激设置：单刺激、强度3V、波宽l0ms。 熟悉后可进入通用程序。 ①通道1选张力。

②根据信号图形适当调整放大倍数、扫描速度。 ③设置刺激器：单刺激，强度3V，波宽l0ms。

（6）调整张力换能器位置，进一步拉紧连接心尖与张力换能器的丝线，根据屏幕上的曲线调整灵敏度。曲线上升支为收缩期，下降支为舒张期。

（7）开启刺激，将刺激输出电极先在骨骼肌上检查，确定有刺激输出，然后停止刺激，将输出线红线连在蛙心夹上的漆包线上(连接处应预先刮去漆层)，白线夹在蟾蜍伤口处皮肤上。开始观察记录。

（8）开启刺激，观察当刺激分别落在心肌收缩曲线的各个部位时，是否有期前收缩和代偿间歇出现，如未出现，可适当调节刺激的强度和波宽。 【注意事项】

(1)破坏脑和脊髓应完全，以免实验中动物活动影响曲线记录。 (2)随时用任氏液润湿心脏。

(3)注意保护张力换能器，不要过分牵拉，轻轻地提起心脏。 (4)注意安放在心室上的刺激电极应避免短路。

(5)正式刺激心脏时，应先在骨骼肌上检查刺激是否有输出以及输出的大小。 【思考题】

（1）破坏脑和脊髓后，心脏为何还会跳动? （2）期前收缩后是否一定出现代偿间歇?

（3）实验中可否同时记录心电图?如可，应如何操作?

实验17蛙心电图记录

【实验目的】 观察蛙心电图波形，观察记录位置对心电图波形的影响。

【实验原理】 心脏的电变化可通过导电的体液传导到体表，若将引导电极置于体表不同部位，便能记录心电活动的图形，这就是心电图。 【实验对象】 蟾蜍(或蛙)。

【器材和药品】 蛙类手术器械（见实验1）、心电导联线、任氏液。 【操作步骤和观察项目】

(1)破坏蟾蜍的脑和脊髓，用大头针背位固定四肢于蛙板上，再用1颗大头针插入蟾蜍胸前的皮下，不要扎进肌肉。

将心电导联线的插头插入心电输入口（MS2000和MS4000），心电导联线分别接在蟾蜍四肢和胸前的大头针上（红线接右前肢，黄线接左前肢，绿线接左后肢，黑线接右后肢，白线接胸前）。 ASB240U系统采用生物电引导电极。 (2)打开多媒体生物信号记录分析系统。

1通道信号选“心电”，根据波形情况调整增益。 （3）顺次序观察记录I、Ⅱ、Ⅲ导联。 【注意事项】

(1)破坏脑和脊髓应彻底，使其肌肉完全松弛，以避免肌电干扰。 (2)记录信号不好时，可轻刮大头针，以使导电良好。

(3)如用小鼠记录心电图，可先将小鼠用0.3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，按l0ml/kg剂量腹腔注射，每只约0.2～0.4ml。

(4)如用家兔记录心电图，用3%戊巴比妥钠按1ml/kg剂量耳缘静脉麻醉。 【思考题】

（1）从肢体或体表为什么能引导记录出心脏的电活动变化？

（2）同一心脏的电活动变化为什么在不同导联的心电图波形不相同？

实验18蛙心容积导体实验

【实验目的】 了解容积导体的概念，观察心脏位置对心电图波形的影响。

百度搜索“77cn”或“免费范文网”即可找到本站免费阅读全部范文。收藏本站方便下次阅读，免费范文网，提供经典小说综合文库生理学实验(4)在线全文阅读。