生理学实验(3)

(5)配制草酸盐抗凝剂：取草酸钾0.8g加草酸铵1.2g加蒸馏水至100ml。配成溶液后，每1ml血液可用0.1ml混合草酸盐抗凝剂，将抗凝剂加入分血管内，均匀沾遍分血管管壁，置于60℃～80℃烘箱中烘干备用。

(6)采血：按分血管刻度采血。打开动脉夹，动脉血流入分血管，尽量精确至刻度处。轻轻摇晃使血液与抗凝剂充分混合。

(7)离心：开动离心机时，速度由慢至快，逐渐达到3 000转/min，离心30min后，再由快转慢，最后停止。 (8)取出分血管，此时上面是淡黄色血浆，下面是红细胞，分界处有一白色薄层，是白细胞和血小板，观察血细胞占全血的容积百分比的刻度数。 【注意事项】

(1)实验应在2h内完成，以免发生溶血和水分蒸发，影响结果的准确性。 (2)实验后及时清洗用具。

(3)烘箱温度不宜高于80℃，以免抗凝剂发生化学变化失去抗凝作用。 【思考题】

（1）草酸盐抗凝血的机制是什么?

（2）哪些情况可能导致血细胞比容改变？

实验9 红细胞渗透脆性试验

【实验目的】 学习测定红细胞脆性的方法，观察不同浓度的低渗盐溶液对红细胞形态和容积的影响。加深理解细胞外液渗透张力对维持红细胞正常形状与功能的重要性。

【实验原理】 红细胞细胞膜对水有通透性，但对无机离子通透性很低。将红细胞置于不同浓度的低渗盐溶液中，可以检查红细胞膜对低渗盐溶液的抵抗力，这种抵抗力的大小，可以作为红细胞渗透脆性的指标。抵抗力小，表示渗透脆性大；反之，表示脆性小。开始出现溶血的NaCl溶液浓度，为该血液标本红细胞的最小抵抗力，即最大脆性(通常在0.40%～0.44%之间)这表示那些脆性最大的红细胞开始破裂；出现完全溶血时的低渗NaCl溶液，则为该血液红细胞的最大抵抗力，即最小脆性(通常在0.32%～0.36%之间)。这表示脆性最小的红细胞完全破裂。生理学上将使红细胞能保持正常形状和容积的溶液称为等张溶液，等张溶液一定是等渗溶液。但等渗溶液(如1.9%尿素溶液)并不一定就是等张溶液。 【实验对象】 家兔。

【器材和药品】 试管架、小试管(10mm×75mm)15支、2ml吸管4支、5ml注射器、8号针头、干棉球、显微镜、载玻片、盖玻片、1%NaCl、0.85%NaCl、蒸馏水、1.9%尿素溶液。 【操作步骤和观察项目】

(1)制备低渗盐溶液：取干净小试管12支，依次编号排列在试管架上，按下表分别用二支2ml吸管向各小试管内加入1%NaCl和蒸馏水，混匀，即得到从0.68%～0.24%的12种不同

浓度的低渗NaCl溶液。

表5-1 低渗NaCl溶液的配置

试管编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1%NaCl

(m1) 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6

蒸馏水

(m1) 0.8 0.9 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9 NaCl

浓度(%) 0.68 0.64 0.60 0.56 0.52 0.48 0.44 0.40 0.36 0.32 0.28 0.24

(2)再准备3支试管，分别加入lml 0.85%NaCl，lml l.9%尿素溶液，lml蒸馏水。 (3)采血：用5ml注射器在家兔耳缘静脉取血lml，用干棉球止血。(如是与“血细胞比容测定”同时做，可在上述实验的颈总动脉插管内放血lml) (4)采血后立即向上述15只试管内各加血一滴，血滴的大小要尽量保持一致，轻轻混匀。

(5)先观察加入0.85%NaCl溶液，1.9%尿素溶液，蒸馏水三试管的变化，无色的溶液是否会变色?其余试管静置1小时再行观察。可有以下情况出现：

①试管内液体完全变为透明红色，管底无细胞，说明红细胞全部破裂，称为完全溶血。

②试管内液体底部为混浊红色，表示有未破裂的红细胞，而上层出现透明红色，表示有部分红细胞破裂，释放了其中血红蛋白的称为不完全溶血。 ③试管内液体底部为混浊红色，上层为无色透明液体，说明红细胞完全没有破裂。 (6)记录该血液标本的红细胞脆性范围(即开始出现溶血时的NaCl溶液浓度与完全溶血

时的NaCl溶液浓度)。

(7)取0.85%NaCl中红细胞以及未完全溶血的低渗盐溶液中红细胞，放在载玻片上，盖上盖玻片，在显微镜下观察红细胞形态，比较其差别。 【注意事项】

(1)配制不同NaCl溶液时应力求准确。 (2)滴加血液时应尽量使滴加血量准确。 【思考题】 （1）为什么红细胞在一定范围内对低渗溶液有一定抵抗力?其他细胞也有这么好的抵抗力吗?

（2）同一个体的红细胞的渗透脆性为何不同?

（3）为什么红细胞在等渗尿素溶液中会迅速发生溶血? （4）红细胞渗透脆性有何生理意义和临床价值?

实验10 红细胞沉降率试验

【实验目的】 学习红细胞沉降率的测定方法 【实验原理】 红细胞是血液中数量最多的有形成分，红细胞在血液中比重最大，因而在体内抽出经过抗凝处理静置的血液中红细胞应该下沉，而在其上部析出血浆。但红细胞在血浆中沉降速度很慢，我们称之为红细胞的悬浮稳定性。通常以第1小时末红细胞下沉的距离(即析出的血浆高度)表示红细胞沉降的速度，称为红细胞沉降率，简称血沉，健康人的血沉在一个较小的范围内波动。许多病理情况下(如活动性结核，急性风湿热，癌症)血沉可明显增快，因此红细胞沉降率的测定具有临床诊断意义。 【实验对象】 家兔。

【器材和药品】 血沉管、固定架、小试管、试管架、5ml注射器、3.8%枸橼酸钠溶液。

【操作步骤和观察项目】

(1)在小试管中加入3.8%枸橼酸钠溶液2ml。

(2)兔耳缘静脉取血2ml准确地将1.6ml注入小试管内，轻轻混匀，使血液和抗凝剂充分 混合。

(3)取干燥的血沉管1支，从小试管内吸血到刻度“0”处，拭去管口外面的血液，垂直地竖立在固定架的橡皮垫上，固定在支架上，勿使血液由管下端漏出，注意血沉管不能稍倾斜，管内不应有凝血块和气泡。

(4)静置1h后，读取析出血浆高度即红细胞下降的mm数，即为红细胞沉降率(mm/h)。

(5)小心取下血沉管，即时冲洗晾干。 【注意事项】

(1)抗凝剂应新鲜配置。

(2)所有器具均应清洁、干燥。

(3)自采血起，整个实验应在2h内完成。

(4)沉降率与温度有关，一定范围内，温度越高沉降率越快，故应在20～22℃室温下进行。

(5)红细胞沉降率的正常范围，男性为0～15mm/h女性为0～20mm/h。 【思考题】

（1）为什么在某些疾病时红细胞下沉显著加快? （2）血沉的生理变化如何?

实验11 血液凝固

【实验目的】 了解血液凝固的基本过程以及加速、延缓和防止血液凝固的因素。 【实验原理】 血液凝固是一种发生在血浆中的由多种凝血因子参与的生物化学反应过程。分为三个阶段：

凝血酶原激活物的形成

凝血酶原 凝血酶 (因子Ⅱ)

纤维蛋白原 纤维蛋白 (因子Ⅰ)

不溶的纤维蛋白网罗了血细胞，结果是血液由流体状态转变为胶胨状态，形成了血凝块。

凝血酶原激活物的形成依赖于X因子激活，而X因子的激活可分为内源性和外源性两个途径，由此将血液凝固分为内源性和外源性两个凝血系统。前者指参与凝血过程的全部物质均存在于血液之中，后者指有血管外的其他组织的凝血因子参与。此外，血液凝固还受温度、接触面光滑程度的影响。

【实验对象】 家兔。 【器材和药品】

(1)哺乳类动物手术器械一套(见实验8“血细胞比容测定”)。

(2) 10ml注射器、6号针头、试管架、小试管6支、50ml小烧杯2个、lOOml烧杯、吸管、滴管、恒温水浴器、带橡皮刷的玻棒或竹签、棉花少许。 (3)25%氨基甲酸乙酯、1/40M CaCl2溶液、肝素8u/m1、草酸钾1～2mg、石蜡油、碎冰块。

【操作步骤和观察项目】

(1)按“血细胞比容测定”实验的方法麻醉、固定家兔，切开颈部皮肤，分离皮下组织，插气管插管，分离颈总动脉并插入动脉插管，需要放血时打开动脉夹放血。

(2)观察纤维蛋白原在凝血过程中的作用：取兔动脉血约lOml，分盛于两只小烧杯内，一杯静置，另一杯用带有橡皮条的玻棒或粗糙的竹签搅拌。5分钟后，取出玻棒或竹签，用水冲

洗，观察缠绕在玻棒上的纤维蛋白。比较两个烧杯的血液是否发生血液凝固。 (3)观察影响血液凝固的因素：取干燥小试管6支，按下表安排不同的实验条件。放开动脉夹取血lOml，分装于上述试管中，每管约1.5ml，并立即开动秒表，每30秒倾斜试管一次，直至血液凝固不再流动，记下血液凝固的时间。 实验条件 制作方法 血液凝固时间 粗糙面 1．试管内放棉花少许 2．试管内预先用石蜡油润滑内壁 温度 1．保温于37℃水浴槽 2．放于冰水浴槽中

抗凝剂 1．加肝素8单位，摇匀 2．加草酸钾1～2mg，摇匀

(4)如果肝素管及草酸钾管不出现血凝，两管各加入25mmol/L CaCl22～3滴，观察血液是否会凝固。

【注意事项】 颈总动脉放血时，颈动脉插管中预留的血液弃之不用，取血管内流出的新鲜血液。 【思考题】

（1）肝素抗凝和草酸钾抗凝的机制有何不同?

（2）临床上外科手术时用温热生理盐水纱布按压出血部位止血的机理是什么?

实验12出血时间测定

【实验目的】 学习出血时间的测定方法。

【实验原理】 出血时间是指从针刺使皮肤毛细血管破损后，血液自行流出到自行停止的一段时间。当毛细血管和小血管受伤时，受伤的血管可立即收缩，局部血流减慢，促使血小板粘着于血管的破损处，同时血小板释放出血管活性物质，加强血管的收缩和血小板的聚集。故测定出血时间可了解血管功能和血小板功能(包括质和量)是否正常。

正常人的出血时间约1～4min，出血时延长常见于血小板数量减少者。 【实验对象】 人。

【器材和药品】 消毒采血针、滤纸条、秒表、消毒棉球、75%酒精。 【操作步骤和观察项目】

(1)以75%酒精棉球消毒耳垂或指端，用消毒采血针刺入2～3mm深，让血液自然流出，勿施加压力，自血液自然流出时起计算时间。

(2)每隔半分钟用滤纸吸干流出的血液一次。注意吸水纸勿接触伤口。 (3)计算出血时间：用滤纸上的血点数除以2即为出血时间。 【思考题】

出血时间延长的患者，血液凝固的时间是否一定会延长?

实验13凝血时间测定

【实验目的】 学习凝血时间测定方法。

【实验原理】 从血液离体至完全凝固所需的时间称为凝血时间。本次实验中血液离体后接触玻璃片(带负电荷)凝血过程始动，一系列凝血因子被激活，最后使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。

凝血时间反映血液本身的凝血过程是否正常，凝血因子缺乏或严重的血小板减少，均可使凝血时间延长，正常人的凝血时间玻片法约2～8min，试管法为4～12min。 【实验对象】 人(玻片法)、家兔(试管法)。

【器材和药品】 消毒采血针、玻片、秒表、试管架、小试管3支、5ml注射器2付、6号针头、消毒棉球、消毒棉签、75%酒精。 【操作步骤和观察项目】

(1)玻片法：以75%酒精棉球消毒耳垂或指端，用消毒采血针刺入2～3mm后，让血液自然流出，用干棉球轻拭去第一滴血，待血液重新流出时，以清洁、干燥的玻璃片接取血液一大滴，立即开始计时，于2分钟后，每隔半分钟用针尖挑血一次，直至挑起细纤维蛋白丝为止，所需时间即为凝血时间。

(2)试管法：将三支清洁、干燥小试管，排列于试管架上，以双空针法在兔耳缘静脉采血(当

血液进入第一个注射器后，不要拔出针头，立即换另一个注射器)。开始计时，抽血3ml，取下注射针头，沿管壁平均缓缓注入3支小试管中，血液离体4min后，每隔半分钟将第一管倾斜一次，观察血液是否流动，待第一管血液凝固后，再依次观察第二管、第三管，以第三管的凝固时间作为凝血时间。 【注意事项】

(1)用针挑血时应沿一定方向自血滴边缘向里轻挑，半分钟一次，勿多方向挑动，以防破坏血液凝固时的纤维蛋白网状结构而造成不凝的假象。

(2)如同时作出血时间、凝血时间测定，一般在不同部位刺二针分别进行，但如果第一针自然流血较多，也可接一大滴作凝血时间测定，半分钟后用滤纸吸血测定出血时间。

(3)采用试管法时，试管必须清洁、干燥，内径一致，静脉采血要顺利，不得混入组织液，血液不能产生泡沫，倾斜试管的动作要轻，角度要小。 【思考题】

试管法主要是反映内源性凝血还是外源性凝血?

实验14 ABO血型鉴定与交叉配血

【实验目的】 学习用标准血清鉴定ABO血型的方法，观察红细胞凝集现象。加深理解输血前认真进行血型鉴定和交叉配血试验的意义。

【实验原理】 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型，血型分型的依据就是检查红细胞膜上特殊抗原(凝集原)的类型。在ABO血型系统中，标准血清是指用有较

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