石蜡基因组提取实验SOP

石蜡切片基因组提取实验SOP

一、实验准备 1、实验所用材料

1）试剂QIAGEN ＃56404（石蜡组织DNA） ＃19101(RNA酶) 2、准备步骤

1）准备1.5ml，2ml离心管，高温灭菌。 2）新试剂盒准备

Buffer ATL：检查有无沉淀，有的话70℃水浴，并摇晃。 Buffer AT：检查有无沉淀，有的话70℃水浴，并摇晃。 Buffer AW1：加入25ml乙醇到19ml Buffer AW1，用前摇晃。 Buffer AW2: 加入30ml乙醇到13ml Buffer AW2，用前摇晃。 3）准备材料

刀片；无水乙醇；二甲苯；冰； 4）水浴锅温度调好（56℃，90℃） 5）桌子喷洒干净 6）实验人员带手套。 二、实验步骤

1、用刀片划取5个玻片上的石蜡，放入1.5ml离心管中；短暂离心，使蜡块聚集在管底。

2、加入1ml 二甲苯，vortex 10s，全速离心2min，吸取上清。 3、加入1ml 无水乙醇，vortex 10s , 全速离心2min，吸取上清。

4、重复上述操作；之后空转1min；吸掉全部乙醇后，晾干，使乙醇完全挥发 掉（残留的乙醇会影响下游的反应）。 5、加入180μL Buffer ATL,涡旋振荡混匀。 6、加入20μL的蛋白酶K (平时4℃放置)，混匀。

7、恒温56℃1h（期间需不断震荡，时间可以延长至完全裂解）。

8、恒温90℃ 1h (必须恒温，如果只有一个水浴锅，可将样品从56℃取出，置于

室温，待水浴锅温度升至90℃时将样品放入。时间不能超过1h，否则容易导致DNA断裂)。

9、轻轻离心，甩一下管壁伤的水珠。

10、冷却到室温后，加入2μLRNase A(100mg/ml), 室温2min。

11、加入200μL Buffer AL，涡旋震荡混匀；加入200μL的乙醇，涡旋震荡混匀。（也可以一起加入，最后混匀）。

12、将全部液体转移到柱子中，并8000 rpm 离心1min，之后放入新的收集管

中。

13、加入500μL的Buffer AW1，12000rpm离心1min; 弃掉废液，并让入新的收

集管中。 14、重复上一步骤；

15、全速离心3min(14000rpm),使膜上的乙醇挥发。

16、加入60μL Buffer ATE; (损失5μL)，室温孵育5min，离心1min。 17、吸取1μL DNA，测DNA的浓度。 附：

1）纯DNA：OD260/OD280≈1.8(＞1.9,表明有RNA污染；＜1.6，表明有蛋白质、酚等污染)

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