细胞遗传实验指导 - 图文(6)

亲合力高。因此DNA可被染成蓝绿色，而RNA被染成红色，通过观察细胞内不同颜色所分布的位置，可初步判断DNA和RNA在细胞内的分布情况。

三、实验用品

(一)材料：蚕豆根尖石蜡切片 (二)试剂：

1．Unna染色剂：

甲液：5％ Pyronin水溶液 6ml 2％ methyl green水溶液 6ml 蒸馏水 16ml 乙液：1M醋酸盐缓冲液(PH4.8) 16ml 甲乙两液分别置4℃冰箱备用，用时两液混匀。 2．5％三氯醋酸

3．0.1％RNase的醋酸缓冲液(PH4．8) 4．二甲苯

5．乙醇(70％，85％，95％，100％) 6．丙酮 7．中性树胶

四、实验方法

Brachet反应：按如下所示步骤进行操作

5-10分 1．脱蜡：切片 二甲苯I 3-5分 5-10分 二甲苯Ⅱ

l／2 （二甲苯+纯酒精)

2．复水： 100％乙醇 2分 2分 85％乙醇 70％乙醇 2分 蒸馏水

对照片I 5 ％三氯醋酸 90℃水浴

4．分色： 丙酮

15分 70％乙醇 蒸馏水 对照片II 室温 30分 10-15分 1-2分 0.1％RNase 3．染色：Unna染色 蒸馏水 10-30分

10-30分 5-10分 5-10分 5．透明： 1／2(二甲苯+丙酮) 二甲苯I 二甲苯Ⅱ 21

6．封片：已染色的标本盖玻片中性树脂封片。 7．镜检。 （二）油镜观察

1．RNA被Unna试剂染成红色；DNA被Unna染色成蓝绿色，注意两种颜色的分

布区域。

2．在对照片I中，DNA与RNA被三氯醋酸抽提；在对照片Ⅱ中，RNA被RNase 处理，而DNA不受影响，分别观察之。

五、作业

1． 镜检后，说明RNA和DNA在细胞内的分布情况。

2．仔细观察两种对照片，说明与正常片有何区别。并加以解释，以此说明Brachet

反应对证明RNA的存在的可靠性。

实验十二 细胞电泳

一、实验目的

了解细胞电泳的原理及意义，学习细胞(包括细胞器)电泳速度及其ζ电位的

测定方法。

二、实验原理

所谓细胞电泳，就是将细胞制成悬浮溶液．使其单个游离的细胞分散于等渗的

介质中。在外电场的作用下，细胞在特殊的装置内发生运动．这种现象称作细胞电泳。

细胞表面具有一定的电荷(通常为负电荷)，它能象无机离子一样均匀地分布在

介质中。细胞表面吸附了一层极薄的水膜，它与介质间存在着电位差，此电位差称为ζ

电位。每种细胞在恒定的条件下(如温度、电压、电流，介质浓度，溶液的PH值等)其电泳速度和ζ电位十分稳定，但在各种有害因子病理状态的影响下，可降低其表面电荷，所以电泳速度和ζ电位值也发生改变(降低)。因此，利用细胞电泳对研究生命结构的表面性质，鉴定细胞或单细胞有机体的机能和病理状态，具有重要的意义，是一种十分有用的方法。

有些细胞器(如叶绿体)也具有上述的类似的细胞特性，可进行与细胞电泳类似

的细胞器电泳。

三、实验用品

(一)材料：鼠全血细胞，菠菜叶绿体。

(二)用具：细胞电泳仪，光学显微镜，电子表，台微尺，目微尺，细胞电泳架，

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电泳毛细管，吸血量管，洗耳球，盐桥等。 (三)试剂

1．生理盐水甘油溶液：O.9％NaCl，0.32M甘油溶液，每毫升加入4-5V (国际

单位)的肝素。混匀备用。

2．8％蔗糖甘油溶液：8％的蔗糖，O.32M甘油溶液，每毫升加入4-5V(国际单

位)的肝素，混匀后备用。

四、实验方法

(一) 细胞电泳前的准备工作

1．目微尺校正：与实验二“台微尺与目微尺的校对”相同的操作。

2．毛细管d／10层的测定：电泳毛细管的长度为6cm。内腔是正方形或长方形，

圆形等。在其中相对应的一对内壁中线处，各刻有一条与长轴平行的滚线，而两线之间的距离为电泳室的厚度d。 d的测量同实验二中“厚度的测量”部分。然后将测得的d值除以10，便求得了d／10层的刻度数，将微调回零后，再转动到上述刻度值，便是d／lO层的位置。

3．细胞(或细胞器)悬液调制，用血球计数板对悬液计数，然后调制细胞(或细 胞器)浓度，全血细胞约2000个／mm，叶绿体为5000一10000个／mm。 4．显微镜固定及毛细管和银电极的清洁：

(1)选可翻转的显微镜以免细胞在电泳时迅速下沉，脱离观察面。

(2)用肥皂水(最好用十二烷基磺酸钠)冲洗毛细管电泳室，然后用清水冲洗数 次。

(3)用普通纱布将电泳架两端的银电极擦干净，以免正反两方向的电泳速度显著不

一样。

(二)细胞(或细胞器)电泳速度及ζ电位的测定：

1．根据所使用的输入电源，将仪器背面的电源选择钮“交流一直流”，调至所要求

的位置。

2．接通电源，打开电源开关，指示灯亮。

3．插入直流输出引线，并注意电极夹的正负极短路，以免损坏仪器。

4．将调整开关至“工作”档，换向开关至“正”档，然后调节“电压调节’’及 “电流调节”二旋钮，动物细胞电泳时，电压调至40伏，电流调至lmA；叶绿

体电泳时，电压调至55伏，电流以调至lmA。调好后再将开关推到“停止”档。

5．将制备的样品灌注毛细管电泳室，其灌注方法是：

(1) 将毛细管斜插入被测样品中，由于毛吸管吸引作用，则整个管腔内充满了被

测样液。

(2) 也可用橡皮胶头的吸吮作用将样品灌满电泳室。将注灌样品的毛细管水平移

至电泳架上，并夹紧，然后利用盐桥将细管与银极接通。

6．将电泳架移至显微镜载物台上，调整焦距，使焦面落在管腔的d／lO—d／15

3

3

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处。为了对照可测d／2处的电泳速度。 7．通过直流输出引线夹，分别与两极接通。 8．测量

(1) 将开关调至“工作”档，再调节电压使其达到原来(即操作4中所调)的水平，

由于电场作用，在视野内可观察到管腔内细胞的移动。记录某个细胞通过目微尺2格的时间。

(2) 将开关调至“停止”档，细胞即停止移动。

(3) 将换向开关调至“负”处，调整高速开关调至“工作”档，由于电流方向变 更，则细胞向相反方向移动，此时再选择一细胞按上述方法，记录下电泳时间。 (4) 如此反复测量多次，分别记录实验数据。

(5) 实验结束后，将电压及电流二钮调回到“0”处，调整开关至“停止”处，并

断开电源；将毛细管洗干净，同时将电极擦净，放回原处，显微镜恢复到直立状态。

9．电泳速度计算：根据所测目微尺的实际刻度值，计算出每次的电泳距离S，将 所测电泳距离的总和除以所测时间的总和，得出电泳的平均速度，以下式表示：

W= s1+ s2+ ……+ sn t1+ t2+ ……+ tn =∑s/∑t 一般s以cm计算，t以秒计算

10．ζ电位的计算：根据所测电泳速度，可用下式求得ζ电位：

w×r ζ=140× v w：cm/秒； r：cm； v：伏特； ζ：伏特

五、作业

1．根据实验数据，求出鼠的全血细胞和叶绿体的电泳速度和ζ电位。

2．全血细胞在蔗糖和生理盐水的肝素甘油液的两种介质中时，其电泳速度有无

差别。

附：材料悬液的制备及盐桥制备法。 一．悬液制备：

1．鼠的全血细胞悬液制备

用微量吸取全血10mm3，吹于装有lml生理盐水肝等甘油液，或8％蔗糖肝

等甘油液小管中，吹气使之混匀。 2．菠菜叶绿体悬液制备

参考实验六“叶绿体分离”部分

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实验一 减数分裂

一、实验目的

通过实验熟练掌握减数分裂时期的主要特征，及染色体行为的动态变化，学习制片技术。

二、实验原理

减数分裂是高等生物雌雄性细胞形成过程中的一种细胞分裂，如植物的花药和胚珠、动物的精巢和卵巢中的某些细胞分化为性母细胞（2n），这些细胞再进行连续两次的细胞分裂即减数分裂过程，最终形成４个小孢子或精细胞，或分别形成一个大孢子或卵细胞和三个退化的极体（1n）。减数分裂过程的主要特点是，连续两次核分裂，而染色体仅复制一次，最后形成的四个子核，每个核仅含有单倍的染色体数目，即染色体数减少一半；其次，前期Ⅰ特别长，而且变化复杂，分为细线期、偶线期、粗线期、双线期、终变期等，其中包括同源染色体的配对、交换及分离等。

在减数分裂过程中，通过对染色体形态和数量的动态变化的观察，可为遗传学研究中远缘杂种的分析，染色体工程中的异系鉴别，常规的染色体组型分析以及遗传学的三个基本规律的论证，提供直接或间接的依据。

三、实验用品

１．材料：玉米雄花序，蝗虫精巢等。

２．用品：镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、吸水纸等。 ３．药品：改良苯酚品红等。

四、实验方法

１．玉米花药涂片：

取合适大小玉米花蕾，放到载玻片上将玉米花冠剥开，使花药显露，去除其余部分，滴一滴改良苯酚品红于载玻片上，使花药浸在染液中，然后用解剖针轻压花药，使花粉母细胞挤出，用镊子将花药壁去除掉后，染色５－１０分钟，加盖玻片。在盖玻片上复一层吸水纸，用手轻轻下压，但勿使盖片移动，即可镜检，从不同的压片中观察减数分裂不同时期及染色体动态。

五、作业

１．绘出你看到的前期分裂图，并写出这是什么时期的图像。 ２．说明减数分裂的过程，它和有丝分裂有何不同？ ３．减数分裂在生物进化中有什么意义？

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