生物药物质量控制的生化分析方法(2)

（图1 BCA（bicinchnimic acid）是对一价铜离子敏感、稳定和高特异活性的试剂。）

1.4 生物质谱法

多肽和蛋白质的分子量可用MALDI/MS（基质辅助激光解吸离子化质谱法）或ESI/MS（电喷雾离子化质谱法）直接测定，用质谱法测定蛋白质的分子量简便，快速灵敏、准确。

2 核酸类药物的主要分析方法

2.1 紫外分光光度法测定RNA与DNA含量

核酸类药物多含碱基，具有共轭双键结构，对子外具有特征吸收，RNA和DNA对紫外的特征吸收处于260nm处。在260nm波长下，每1ml含1ugRNA溶液的光吸收值为0.022，每1ml含1ugDNA溶液的光吸收值为0.020。故测定样品在260nm处的吸收值即可测定样品中核酸含量，但应避免核苷酸与蛋白质杂质干扰。

2.2 地衣酚显色法测定RNA含量

核糖核酸与浓盐酸在100℃共热时，即发生降解，形成的核糖继而转变为糠醛，后者与3，5-二羟基甲苯（地衣酚）反应呈鲜绿色，该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂，反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20～250μ g范围内，光吸收与RNA的浓度成正比。地衣酚反应特异性较差，凡戊糖均有此反应，DNA和其他杂质也能给出类似的颜色。因此测定RNA时可先测定DNA含量，再计算出RNA含量 。

2.3 二苯胺法测定DNA含量

DNA分子中2-脱氧核糖残基在酸性溶液中加热降解，产生2-脱氧核糖并形成ω-羟基-γ-酮基戊酸，后者与二苯胺试剂反应产生蓝色化合物，在595nm处有最大吸收，且DNA在40µg ~400µg范围内时，吸光度与DNA浓度成正比。在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应灵敏度。

（图2 ω-羟基-γ-酮基戊醛）

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