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分子生物学(6)

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限制R,修饰 M,识别 S,三个基因编码

S亚基起独立作用,R-M+只修饰,R+M-表现为R-M-→万一保守机制

Ⅰ类酶与识别位点结合之后,其必须M亚基与S-腺苷甲基硫氨酸(SAM)结合使酶变构处于始化状态,以便识别位点结合,半甲基化时以酶-SAM甲基化,非甲基化时限制

切割位点在1000bp以上,特异性差

②Ⅲ:K.亚基与MS亚基,R-则R-M-,MS中如负责识别的突变则R-M-,如发生

在M上,由R+M-,其修饰位点往往在A上,由于其识别序列常仅有一条链有A,所以子代中一个完全无甲基化,可能限制,也可能修饰。

③Ⅱ

二.核酸的分离与纯化 1.母液的配制

①减少系统误差与偶然误差 ②方便使用,省时省力 注意:易分解物质不可用 2.酚-氯仿抽提核酸 3.质粒DNA提取 4.大分子量DNA提取 5.RNA提取 三.核酸电泳 1.Acr

2.琼脂糖凝胶电泳

①1oading buffer 、制胶与上样 ②核酸显色 ③回收DNA

四.DNA与cDNA文库

1.DNA与cDNA文库的基本制作方法

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2.c DNA合成

3.DNA与cDNA文库区别 五.分子杂交

1.Southern, Northern, western,斑点:狭缝 2. Southan杂交 六、PCR

七、DNA体外操作

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