Biolog测定方法

1. Biolog生态板的应用原理

Biolog ECO板上有32个微孔，每32个孔为1个重复，每板共计3个重复。32个微孔中除对照孔外各个孔中都含有一种不同的有机碳源和相同含量的四唑紫燃料。将微孔内的有机碳源作为微生物的唯一能量来源，微生物接种到微孔板的孔中后，若能利用碳源，即能够对其进行生物氧化，有电子转移，四唑紫燃料就能优先俘获电子而变成紫色。颜色的深浅反映了微生物对相对碳源的利用能力。通过Biolog系统的微平板读数器，测定ECO板在590nm波长下的光密度值（OD值），完成数据的采集与存储。运用主成分分析（PCA）或相似类型的多变量统计分析方法展示不同处理条件下微生物群落产生的代谢特征指纹。其理论依据是Biolog代谢类型的变化与群落组成的变化相关。

2. Biolog测定方法

（1）称取相当于10.0g干土的新鲜土壤放入三角瓶中，加入90ml灭菌的生理盐水（0.85% NaCl， W/V），用无菌棉花塞封口。

（2）震荡30min后，静置15min，用移液枪吸取10ml上清液，加入90ml灭菌生理盐水。 （3）按逐步稀释法，将土壤悬液稀释为10-3g/ml。

（4）在超净工作台中用移液器将制备好的土壤悬液接种到BIOLOG ECO板的各孔中，每孔150μL。

（5）将接种好的BIOLOG ECO板盖好盖子，放入25°C的培养箱中培养7天。 （6）每隔24h用BIOLOG读板仪在590nm下测定各孔的吸光度值。

图1 Biolog ECO板中碳源分布

结合有机化合物化学官能团、微生物代谢途径和生态功能3个方面，将ECO板的31种碳源底物分为6大类：糖类、氨基酸类、羧酸类、胺类、酚酸类和聚合物类。

BIOLOG ECO微平板31种不同碳源

糖类

氨基酸类

羧酸类 γ-羟丁酸 α-丁酮酸 D-葡糖胺酸 D-苹果酸

胺类

酚酸类

聚合物类

β-甲基-D-葡萄糖苷 L-精氨酸 D-木糖/戊醛糖 i-赤藓糖醇 D-甘露醇

L-天门冬酰胺 L-苯丙氨酸 L-丝氨酸

苯乙胺 2-羟基苯甲酸 吐温 40 腐胺

4-羟基苯甲酸 吐温 80

α-环式糊精 肝糖

N-乙酰-D葡萄糖氨 L-苏氨酸 D-纤维二糖 α-D-乳糖

D-半乳糖酸γ-内酯 D, L-α-磷酸甘油 1-磷酸葡萄糖

D-半乳糖醛酸

甘氨酰-L-谷氨酸 丙酮酸甲酯

衣康酸

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