转病毒的实验步骤

转病毒的实验步骤——————阮玲玲

第一天

1、提前种细胞，待T25培养瓶长满，在六孔板中选4个孔，每孔种入的细胞密度为50%，培养基DMEM为每孔1ml，标记为12、30、31和对照组；

第二天

2、已知3个分别含有病毒12、30、31的细胞培养皿，分别用10ml不带针头的注射器吸走含有病毒的上清液DMEM，丢掉含细胞的培养皿；

3、用过滤器分别将病毒过滤到EP管中，分别标记为12、30、31；

4、取出前一天的六孔板，待细胞长满50%时，用套10ul枪头的真空泵分别吸走上清液，弃去，取2.5mlDMEM，在孔12、30、31中分别加0.5ml的DMEM，对照加1mlDMEM, 再向孔12、30、31中分别0.5ml含对于病毒的DMEM； 5、在每孔中加入1ulpolybrene 8mg/ml，使其作用浓度为8ug/ml； 6、8小时后，给cell换液：用真空泵吸走含有病毒的3个培养基，取7mlDMEM，对照加1ml，其余每孔2ml； 7、培养两天后的细胞，用套10ul枪头的真空泵分别吸走上清液，用Puromycin(嘌呤霉素） 1mg/ml 1000× 进行筛选，取8ml DMEM至离心管中, 再加8ul Puromycin于其中，混匀，每孔加2ml；

8、两天后，取出细胞，观察，若加病毒的细胞存活率高，对照组细胞死活，则实验成功。

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