灯盏乙素作业(DOC)(2)

RO(1)(2)CH3COCl/MeOH-5℃ rt 12hOOOHO R=Methy or Isopropyl or 3-Methylpropyl or 2-Methylpropyl or BenzylOONH2HOHOOHOOOnOORNH2n=1, R=Isopropyl or n=1, R=3-Methylpropy or n=1 , R=2-Methylpropyl or n=1 , R=Benzyl or n=2 , R=3-Methylpropy or n=2 , R=2-Methylpropyl

三. 提取分离纯化工艺

提取分离工艺总路线

灯盏花干草（150g）60﹪－70﹪乙醇1.5 L提取5 h减压蒸干粗膏150mL热水（60-80℃）温浸，搅拌悬浮石油醚萃取液（80,60,50,30mL）水层（及混悬液）氯仿萃取（80,60,50,30mL）石油醚层（浓缩得膏）水层（及混悬液）乙酸乙酯萃取（80,60，50,30mL）氯仿层（浓缩得膏）升华试验GC-MS鉴定挥发油水层（及混悬液）乙酸乙酯层（浓缩得膏）正丁醇萃取（80,60,50,30mL）水层（静置24h）黄色沉淀正丁醇层（浓缩得膏）

首次分离是由张人伟于1987年完成的[7]。当时采用的方法是乙醇提取后以氯仿、乙醚、乙酸乙酯依次萃取，母液用醋酸铅沉淀粗提，最后用聚酰胺柱层析。第二军医大学的张卫东[2]于2000年全面分离灯盏花化学成分时，依次过大孔吸附树脂柱、葡萄糖凝胶柱和硅胶柱，同样分离得到乙素含量高的灯盏乙素。 胡倩，王玲等[6]通过正交实验确定了超声波法提取灯盏花素的最佳工艺条件为:以10倍量的70%乙醇提取3次,每次60 min。在此条件下,所得浸膏中灯盏

乙素含量达到2.15%,灯盏乙素提取率达到83.39%。超声波提取法是一种快速、简便、高效且稳定可行的灯盏花素提取方法。

以植物化学常用成分研究方法中的不同极性溶剂梯度萃取方法将粗提物分为五个极性部分。并从水层部分分离得到高纯度灯盏花素纯品。此种方法一方面是首次应用到灯盏花素分离，另一方面与其后的石油醚部分化学成分研究互不冲突，药材利用率较高。得到的灯盏花素纯品乙素含量达96%以上，回收率达70%以上，证明超声提取、极性溶剂梯度萃取方法适用于灯盏花素的富集，可应用于进一步工业生产研究[7]。

四．灯盏乙素化学图谱

紫外吸收光谱

以甲醇为溶剂，甲醇为空白，在285nm和315nm处有吸收，说明可能有苯环和双键以及共轭双键存在，有待其它图谱验证。

红外图谱

KBr压片得红外图谱：3375cm-1处尖峰为-OH，1600cm-1处峰为-C=O，1722cm-1处峰-COOH，苯环骨架振动在1400~1600cm-1。

灯盏乙素的一级质谱图

灯盏乙素的二级质谱图

一级质谱中m/z 463 [M+H]+，说明灯盏乙素分子量为462；二级质谱中287 [M-176+H]+处为葡萄糖醛酸。

五. 活性测试

灯盏乙素的大鼠药代动力学和血小板聚集抑制率的相关性研究[9]。试验结果显示，随AUC0→4h 的增加，血小板抑制率反而下降，说明血小板抑制率仅与瞬时血药浓度有关，药物对血小板聚集率的影响不是简单的累积效应。提示灯盏乙素为直接作用于血液系统的药物,不存在药效室，可将其药效直接与血药浓度进行拟合。

灯盏乙素静脉注射后，血药浓度下降很快，推测灯盏乙素在体内可能主要以代谢产物的形式存在。而血小板抑制率在4h时有所升高，可能是由于灯盏花素的代谢产物同样起到抑制血小板聚集的作用或是灯 盏乙素在体内存在肝肠循环现象，导致其血小板聚集抑制作用的延长。中剂量(7.5 mg/kg) 的灯盏乙素对ADP诱导的血小板聚集抑制率均在0.25h时出现下降，而后在0.5h又升高，但灯盏乙素的血药浓度并没有出现这一现象，是否在0.5h时已经有灯盏乙素的代谢产物参与了药效，还有待进一步研究证明。

灯盏乙素对老鼠胃癌细胞株的体外抑制作用[10]。 道恶性肿瘤。本实验观察了灯盏花乙素体外对两株胃癌细胞SGC- 7901、BGC-823(胃腺癌细胞系)的抑制作用。从实验结果可知： 灯盏花素在高浓度( 1000Ixg/mL)下对胃癌细胞SGC- 7901的抑制率为47.07%，抑制作用与药物浓度呈正相关； 而灯盏乙素对胃癌细胞BGC-82在高浓度(1000Ixg /mL )下无抑制作用。南于胃癌细胞SGC -7901为中

分化的人胃腺癌细胞，胃癌细胞BGC-823为人低分化前胃粘液腺癌细胞，由此可初步得出：灯盏乙素在高浓度( 1000txg/mL)下对中分化的肿瘤细胞有抑制作用，对低分化前的肿瘤细胞无抑制作用。由此可以推断：灯盏花素，作为一个临床应用多年治疗心血管疾病的药物，虽然没有直接抗肿瘤作用，但可以通过抑制TGF2β1 信号传导促进机体免疫功能的恢复，对循环系统具有明显的改善作用， 从而阻止肿瘤手术后的复发和转移，其抗肿瘤的辅助治疗作用可能是通过增强机体免疫功能实现的，可为后期进一步的抗肿瘤机制研究提供理论基础。

六．讨论

本文主要介绍了灯盏乙素的来源，临床及药理作用。通过查阅文献明确了灯盏乙素的化学结构，其主要合成方法以及分离提纯的最佳工艺。并且还查阅到灯盏乙素的紫外谱图，HPLC谱图,红外图谱，质谱图，对灯盏乙素有了更明确的认识，同时能够更好的对灯盏乙素进行提取分离以及进行化学结构修饰，更好地发挥其药理以及临床作用。

参考文献

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[3] 孙文基(Sun WJ)，绳金房(Sheng JF). 天然活性成分简明手册[K]. 北京:中国医药科技出

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[4] 崔建梅(Cui JM)，吴松(Wu S). 灯盏花素的研究进展[J]. 天然产物研究与开发(Nat Prod

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[5] 叶海,，张灿，沈文斌等. 灯盏乙素聚乙二醇前药的合成与表征[J]. 中国天然药物，

2006,4(4) :283-286.

[6] 胡倩，戴霖霖，王玲等. 灯盏花素的提取与分离工艺优化研究[J]. 化学与生物工程，

2009,26(4):58-60.

[7] 张人伟，张元玲，王杰生等. 灯盏花黄酮类化学成分的分离鉴定[J]. 中草药，1988,19(5):

7-9.

[8] 傅晓钟，张伟，王永林等. 灯盏乙素苷元4’-L-氨基酸衍生物的设计、合成和抗氧化活

性[J]. 药学学报，2011,46(5): 548-555.

[9] 李烨，李春艳，杜荣琼等. 灯盏乙素对胃癌细胞株的体外抑制作用，大理学院学报[J]，

2011，10(6):14-16.

[10] 吴毅彦，侯娟等. 灯盏乙素的大鼠药代动力学和血小板聚集抑制率的相关研究[J]. 天

津药学，2010,22(6), 1-4.

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