基因工程习题的答案

文件PCR、染色体DNA提取的答案： 选择题：答案：1B2B3A4C5D6ABC7E 简答题：答案

1、引物1：5’-GACCTGTGGAAGC； 引物2：5’-CAATCCCGTATG

2、由于GC对间是三个氢键的作用力，比两个氢键作用力的AT对要稳定，因此DNA的解链与退火都是依赖于G+C的含量与A+T的含量的比例。GC对普遍比AT对更倾向于非特异性的复性，所以GC含量高的引物比AT含量高的引物更适合于PCR反应。

3、（1）利用DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。 （2）至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。 4、不同点自己去总结。

最根本的差别：PCR用双引物，体内复制用单引物。 染色体DNA的提取 选择题：答案1B2B3A4D

填空题：答案：1.（1）使蛋白质变性；（2）由于它能使蛋白质变性，故也能使核小体和核糖体解聚，释放出DNA和RNA，提高DNA的得率。

2.是一种有机试剂，可以降低表面张力，从而减少气泡产生。

3.（1）水解能力很强，作用范围广；（2）在SDS和EDTA中保持高活性，可以同SDS和EDTA同时使用。 4.螯合Mg，抑制核酸酶的活性。

5.中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力。

6.（1）包埋吸水法 （2）蒸发 （3）膜过滤法 （4）有机溶剂抽提法 7. -70℃ 8.只将RNA分离出来；可将DNA与RNA一起分离出来。 9.除去小分子的无机离子。

10.（1）核酸酶降解；（2）化学降解；（3）物理减切 11.（1）酸变性；（2）碱变性；（3）热变性；（4）酶水解 12.抑制真菌污染 13.手上常有核酸酶 14.乙醇使DNA分子脱水 简答题：1.答案：

（1）溶解膜蛋白及脂肪，从而使细胞膜破裂；（2）溶解核膜和核小体，使其解聚，将核酸释放出来；（3）对RNase、DNase有一定的抑制作用；（4）SDS能够与蛋白质结合形成R-O-SO3…R蛋白复合物，使蛋白质变性沉淀。 2.答案：（1）细胞内存在很高的核酸酶活性，DNA裸露后，很容易遭到核酸酶的降解； （2）在分离DNA的过程中，要用到一些酸碱等化学试剂，也会使DNA断裂；

（3）在DNA的分离过程中要经过多次离心、吸取、转移等，产生的机械张力剪切会使DNA断裂。 核酸分子杂交

一、名词解释（略）二、单项选择题

1A2B3D4A5B6A7C8A9B10B11A12A13B1415C16B17D18C19A20C21C22A23A 三、多项选择题

1ABCD2ABCD3AD4 5CD6ABCD7 8BCD9 10 11 12 13ABCD14 15 16AC17ABCD18ABD19ABC20AB21ABCD 四、填空题

1、待测核酸；探针2、探针3、越慢4、DNA复性5、二；三6.Southern印记杂交；Northern印记杂交7、组织原位杂交；细胞原位杂交8、RNA酶保护分析法；核酸酶S1保护分析法9、基因组探针；cDNA探针；寡核苷酸探针；RNA探针10、11、化学法；酶法 五、问答题（略）六、论述题（略） 基因工程原理练习题及其答案

--2+

1．70 2．(1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达 3．克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择 4．限制性酶切图谱 5．属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名 6．(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积 7．EcoK；EcoRl 8．GGCC；异源同工酶

9． 枯草杆菌蛋白酶；(1)5'-3'合成酶的活性；(2)3'-5'外切核酸酶 10．碱性磷酸酶；5’端的磷酸基团

11．Ca2+ 12．5'-3'合成； 3'-5'外切 13．DNA聚合酶I：5'一3'外切核酸酶；5'一3'合成酶 14．S1核酸酶切割；DNA聚合酶补平 15．核酸水解酶H；RNA 16．质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体

17．复制区： 含有复制起点；选择标记： 主要是抗性基因；克隆位点： 便于外源DNA的插入 18．质粒消除(或治愈) 19．pMBl； pSCl01；pSF2124(R质粒) 20．1000kb；300kb 21. 严紧 22．pBR322和M13；pMBl；转座子

23．它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增；对某些噬菌体(如?噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽 24．没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记

25．质粒；?噬菌体； 45 26．(1)分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记 27．复制区；IG区

2+

28．75％～105％ 29．螯合Mg离子，抑制核酸酶的活性 30．中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力

31．(1)合成探针；(2)合成cDNA；(3)用于PCR反应；(4)进行序列分析

32．T—载体 33．第二链合成时形成的发夹环? 34．乙醇使DNA分子脱水

35．(1)保持正确的可读框 (2)能够使其转录的启动子 (3)具有翻译的起始和终止信号 36．接受外源DNA的生理状态

37．(1)黏性末端连接； (2)平末端连接； (3)同聚物接尾连接； (4)接头连接法 38． 基因组DNA克隆； 基因组DNA文库 39．cDNA克隆；cDNA文库 40．聚合酶链式反应(PCR) 41．0?C；42?C

42．(1)遗传学方法； (2)物理筛选法； (3)核酸杂交法； (4)表达产物分析法 43．插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选 44．基因组DNA；cDNA 45．Klenow酶填补的方法；T4DNA聚合酶

46．(1)用M13噬菌体载体合成单链DNA探针；(2)从mRNA反转录合成单链cDNA探针；(3)用不对称PCR合成单链DNA探针

47．外源基因是否进行了转录

48．两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达一些基因，而 在另一个细胞群体中不能表达这些基因

49．Northern印迹 50．Southern印迹 51．5’?3’合成酶；3’ ?5’外切核酸酶 52．(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表达载体；(3)不含内含子

53．(1)印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件

54．(1)抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)同一个抗原可以同几种抗体结合； (3)抗体能够被标记 二、选择题(单选或多选)

1．c；2．c； 3．b； 4．b 5．b，C，d，e； 6．c； 7．b； 8．d；9．d； 10．B； 11．d； 12．a； 13．d； 14．b 15．d； 16．c；17．a，b；18．a；19．c；20．d；21．c；22．C； 23．b； 24．C；25．d；26．a，C，d；27．b；28．c； 29．b；30．a；31．c； 32．a,c,d,e， 33．a，b，c；34．b； 35．c；36．c； 37．d； 38．b；39．c；40．a；41．c； 42．a，b，c； 43．b； 44．b； 45．d； 46．a；47．a； 48．c； 49．c；50．b；51．c； 52．c； 53．b； 54．a,c,d；55．a； 56．b；57．a，b； 58．c；59．a；60．d；61．b； 62．c； 三、简答题

2． 答： 盐离子浓度不对，温度不对，甘油浓度过高。

3． 答： 回文序列是：5'-CATATG-3，

4． 答：GATATC；AAATTT，因为它们是回文序列。

5．答：注意星活性，先低盐，后高盐；先低温酶，后高温酶；并且可以直接在换酶前将第一种酶失活，再加第二种酶，否则，易产生星活性。或使用通用缓冲液。

6． 答： 由于反转录酶缺少在E．coli DNA聚合酶中起校正作用的3'-5'外切核酸酶活性，所以聚合反应往往会出错，在高浓度的dNTP和Mg2+下，每500个碱基中可能有一个错配。

(1)独立复制； (2)有选择标记； (3)有独特的酶切位点； (4)能转化但不扩散。

7．答：含有细菌质粒和克隆的真核生物DNA片段的杂种质粒，有两个复制起点和既能在细菌又能在真核细胞中进行选择的选择标记，所以，很容易从一宿主转到另一个宿主(来回穿梭)。 8．答：基因组克隆包含所有不在cDNA中出现的内含子。 9．答：(1)DNaseI造成切口；

(2)DNA聚合酶III的5’ ?3’外切核酸酶进行切割； (3)DNA聚合酶Ⅲ的5’?3’合成酶进行修补；

(4)在修补过程中，随着切口(nick)的移动，将放射性的底物掺人到双链DNA中。

rsrr

10.答： (1)加四环素；(2)Tet Kan和Tet Kan；(3)重新点种在含Tet、Kan和只加Tet的平板上，选择只在Tet平板上生长的菌落，即为所需的重组体。 11．答: 原理：

由于四环素的作用只是抑制细菌蛋白质的合成，而不是杀死细菌；而氨基酸类似物环丝氨酸如果掺人蛋白质，

rs

则是致命的。因此在有四环素的条件下，环丝氨酸能够杀死tet而不杀死tet的细菌。经过环丝氨酸处理后，存

sr

活的细胞中tet型得到很大富集，而经过若干次连续处理，即能获得在tet基因内含有插人物的质粒的细胞。 基本操作：

rs

(1)转化后有三种表型的细菌，其中只有一种是重组体：ApTc；

(2)用重组DNA转化受体菌后，将受体菌培养在加有四环素和环丝氨酸的培养液中培养；此时只有非重组的双抗性菌可以生长，其他都被抑制；

rs

(3)由于有环丝氨酸的存在，ApTc表型的菌生长到一定程度就会死亡；

(4)由于四环素只有抑菌而无杀菌作用，此时若解除四环素(离心洗涤)，加入氨基苄青霉素继续培养，则可使重组体大量生长。

基因工程的酶学基础

一、单选题 1B2B3A4B5D6C7D8C9A10E11D12D13B14D15A 重组子筛选与鉴定，分子杂交

选择题bbb1D2C3E4D5A6B7C9A10B11E12B13B 名词解释（略） 判断题 答案：全错 简答题

1. 许多载体（如PUC系列）带有一段大肠杆菌的DNA片段，为β-半乳糖苷酶（Lac Z）的调控序列和N端146个氨基酸的编码序列（编码Lac Z的α肽）。某些特定的宿主菌可表达Lac Z的C端（即ω肽）。单独存在的α肽和ω肽都没有活性，但当它们同时在宿主细胞表达时，可互补产生Lac Z的活性，将底物X-gal水解，形成蓝色化合物，这种现象称为α互补。

2. 先将重组体的转化菌落涂布含有Tet抗性的平板，再从中挑取抗Tet的菌落接种于含有Amp抗性的平板，选取不在Amp抗性的平板上生长而仅在Tet抗性的平板上生长的菌落即可得到转化有重组体的菌落。 练习题 填空题

1、48．5；60； 滚环； 双；12； COS 2、没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记 3、质粒；λ噬菌体； 45 4、复制区； IG 区 5、75％一105％

6、限制—修饰系统的一个组成部分；双链DNA 分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA 双链结构

7、 HindⅡ

8、 2~4 个相同的；切割位点；识别位点的；平切和交错切；平；具有突出黏睦末端；Mg2+； ATP；SAM 9、属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名 10、混合均匀；防止部分酶切 11、(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积 12、1/4 13、50%

14、枯草杆菌蛋白酶；5’ 3’，聚合酶；3’ 5’外切酶两种活性 15、碱性磷酸酶；磷酸基团 16、Ca2+ 17、DNA 聚合酶I：5’ 3’外切核酸酶：5’ 3’合成酶 18、S1 核酸酶切割；DNA 聚合酶补平 19、核酸水解酶 H；RNA

20、复制区： 含有复制起点；选择标记： 主要是抗性基因；克隆位点： 便于外源DNA的插入 21、 pMBl； pSCl01；pSF2124(R质粒) 22、严紧 23、pBR322和M13；pMBl；转座子

24、 它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增；对某些噬菌体(如l噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽 25、没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记

26、质粒；λ噬菌体； 45 27、螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性 28、中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力 29、T—载体 30、发卡结构31、乙醇使DNA分子脱水 选择题

1、B2、C3、B4、D5(a)6(b)7（d）8（d）9(b)10(a)11(b)12(b)13（d）14(a)15(b)16(c)17(a)18（d）19（d）20(c)21(c)22(a)23(d)24(d)25(b)26(a) 问答题（略）

复习单选题（略）：自己查找文件5的答案自己做

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