分子荧光法测定罗丹明B的含量

分子荧光法测定罗丹明B的含量

一、目的和要求：

1． 掌握荧光法测定罗丹明B的含量的基本原理。

2． 了解分子荧光分光光度计的基本构造和原理，并能简单操作。

二、原理：

罗丹明B在水中是强的荧光物质，并且在低浓度时，荧光强度与罗丹明B浓度呈正比： If=kc 基此，测定一系列已如浓度的罗丹明B的荧光强度，然后以荧光强度对罗丹明B浓度作标准曲线，再测定未知浓度罗丹明B的荧光强度，把它代入标准曲线方程求出其浓度。

图1罗丹明B的分子结构

三、实验仪器与试剂：

1．仪器

RF-5301PC分子荧光分光光度计 200 mL的容量瓶12支 2 mL的吸量管12支 250 mL烧杯12个

2．试剂 l×l0-4 g?mL-1的罗丹明B储备液

四、操作步骤：

1．标准溶液的配制 取5只10 mL的容量瓶分别加入l×l0-4 g?mL-1的罗丹明B储备液0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.20，1.40，1.60，1.80，2.00 mL,，用水稀释至刻度，摇匀。

2．绘制发射光谱 激发波长固定在556 nm, 在500-700 nm范围内扫描荧光发射光谱。

3．绘制标准曲线 荧光发射波长固定在640 nm处，从发射光谱上取系列标准溶液的荧光发射强度。

4．未知试样的测定 在标准系列溶液同样条件下，测定未知样品的荧光发射强度。

5．绘制荧光强度If对罗丹明B溶液浓度c的标准曲线，并由标准曲线求算未知试样的浓度。

五、数据处理 六、讨论：

1. 亮绿色闪光结晶粉状物，溶于水和酒精，呈带强荧光的蓝光红色溶液，易溶于溶纤素， 微溶于丙酮；遇浓硫酸呈黄光棕色，有强的绿色荧光，稀释后呈大红色转为蓝光红色和橙色。其水溶液加氢氧化钠后加热，形成玫瑰红绒毛状沉淀。

2. A. 光源： 为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。

B．激发单色器：置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。

C．发射单色器：置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。

D． 样品室：通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。

E． 检测器：一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。

3. 利用970CRT荧光光度分光测试荧光激发光谱和荧光辐射光谱（970CRT型荧光度计的 测量波长范围在200nm~800nm）荧光激发光谱测试：将测试样品放入样品盒中。选择合适的荧光辐射波长（可根据样品在自然光下的体色来选择），改变激发光的波长同时测定所选定的荧光辐射波长的能量随激发光波长变化的关系，就得到了激发光谱。 荧光光谱测试：将测试样品放入样品盒中。选择合适的激发光波长（选择荧光激发光谱中激发灵敏度较高的波长），改变荧光的波长同时测定其能量随波长变化的关系，就得到了荧光光谱。 4．影响因素有：溶剂的极性，温度，溶液的PH，溶液的浓度等等.

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