微生物学讲义(4)

利用物理因素作用于微生物，将之杀灭或清除，称为物理消毒法。常用的物理法有：机械消毒法、热力消毒法、光消毒法、电消毒法、声消毒法及辐射消毒法。 ? 一、机械消毒法

? 此方法不是真正的杀灭微生物，而只是达到机械排除。如刷、冲洗、擦拭、吸附、过滤等。上班前进入洁净室的洗手，也属机械消毒法。由于反复冲洗、擦刷，使细菌机械地被排除。有人证明用8min流水冲洗可除菌80%，15min可除菌99.0%。

? 过滤除菌是用物理阻留的方法除去微生物。如用砂滤法制备生活饮用水，厂房空气净化设施以及戴口罩等，都是利用过滤除菌的有效方法。目前，滤膜器孔径最小可达0.01μm，能制取优质的注射用水．可将空气处理到100l中只有1颗0.3μm尘粒的超净水平。 ? 二、热力消毒法

? 在所有消毒与灭菌的方法中，热力是一种应用最早，效果最可靠．使用最广泛的方法。热杀灭微生物的机理是损伤微生物的细胞壁，细胞膜、破坏微生物的蛋白质(凝固或变性)．从而导致其死亡。热力消毒与灭菌的方法分为两类：干热和湿热。 ? A)干热消毒与灭菌

? 1．灼烧：灼烧是直接用火焰灭菌。如微生物实验室接种针、接种环、涂菌捧等不怕热的金属器材的灭菌。在没有其它办法灭菌的情况下，对于器械亦可用灼烧法灭菌。灼烧法来菌温度很高，效果可靠，但对器械有破坏性。

? 2．干烤：干烤灭菌是在烤箱中进行。适用于高温下不损坏、不变质物品的灭菌。例如玻璃制品：平板、试管、吸管，注射器等均可用此法灭菌，一般在180℃下，干烤l～2h。 ? 使用烤箱灭菌时，应注意下列事项：

? (1)玻璃器皿应完全洗净，以免吸附物高温时炭化，洗净后完全干燥，再放入烤箱内。

? (2)物品包装不宜过大，放置物品不宜超过烤箱高度的三分之二。物品间应留有空隙，以利于热空气对流。

? (3)灭菌过程中不得中途打开烤箱放入新物品，以免突然冷却致使物品爆裂。

? (4)在高温下易损坏的物品，如纸、棉织品、塑料制品、橡胶制品不可放入干烤箱内灭菌。

? (5)灭菌时间应从烤箱内温度达到所需温度时算起。

? 3．红外线照射：也是干热灭菌的一种方法。其波长是O.77～1000μm的电磁波，有良好的热效应，尤其是在1～10μm波长段。红外线的热能直接由放射的电磁波产生，不需经空气传导，加热速度快。但热效应只能在照到的表面产生，不能使一个物体的左右前后均匀加热。高强度远红外线可产生200℃高温，故可用于医疗器械的灭菌，60年代前曾受重视，但因后来塑料高分子产品增多，使这种灭菌方法未能广泛使用。 ? (B)湿热消毒与灭菌

? 1．煮沸法：煮沸法消毒是使用最早的消毒方法之一。由于其方法简单、方便、经济、实用效果好，故今仍是一种常用的消毒方法。

? 煮沸消毒的能力较强，一般在水沸腾后再煮5～15min，即可达到消毒目

?

? ?

? ? 表 压 的。l00℃几乎能立即杀灭细菌繁殖体、真菌、立克次氏体、螺旋体和病毒等。芽胞型菌则抗煮沸能力较强，一般要1h以上，甚至高达8 h之多。 如能在煮沸时加入增效剂，可以增强煮沸消毒效果，如在煮沸针尖时，加入l～2%碳酸钠，煮沸5min即可达到灭菌要求，同时还要防止其生锈，保持它的锋利。零配件(如瓶塞穿孔器、接头、护套)的清洗处理中，加0.5%盐酸或氢氧化钠液煮沸亦起到增效的作用。

2．高压蒸汽灭菌：目前常用下排气式高压灭菌器，使用方法等介绍如下： 手提式高压灭菌器：是实验室、卫生医疗单位常用的小型灭菌器。由铝合金材料制造，为单层圆筒，内有一铝质的盛物捅，直径28cm，深28cm，容积约181，全重18kg，使用压力<1．4kg／cm2。主要部件有；压力表1个，指示高压锅内压力。排气阀1个，下接排气软管，伸至盛物桶下部，用以排除冷空气。安全阀1个，当高压锅内压力超过1.4kg／cm2时，可自动开启排气。使用方法：在高压锅内放入约4cm深的清水，将消毒物品放入盛物桶内，装物不宜太多，且应使物品间留有空隙，盖上锅盖，注意将排气软管插入盛物桶壁上的方管内，拧紧螺丝。当加热到表压为5～10磅／英寸2*时，打开排气阀。放冷空气，至有蒸气排出，即关闭排气l倒，待上升至所需压力，调节热源，维持到预定时间。结束后排气至0，打开盖子，取出物品。消毒液体时，最好慢慢冷却，以免减压过快液体外溢或瓶破裂。

高压灭随应注意以下各点：

(1)必须将灭菌器内冷空气抽尽或排尽，空气的排尽程度与温度的关系极为密切(表22)。

高压灭菌器内压力和冷空气排放与温度的关系 排出不同程度冷空气时高压锅内温度（℃） 全排出 115 121 排出2/3 109 115 排出1/3 100 109 未排出 90 100 磅/英寸2 kg/cm2 10 15 0.70 1.05 ? (2)合理计算时间。其时间的计算，应从灭菌器内达到温度要求时算起，至完成灭菌为止。一般下排气式高压灭菌器为121℃15min或ll5℃30min。 ? (3)包装与容器不宜过大，过紧，也不宜将物品放于铝饭盒内。 ? (4)合理布放物品。不宜过多，一般为85%，且物品间留有空隙。

? (5)注意安全操作，每次灭菌前应检查灭菌器是否处于良好的工作状态，尤其是安全阀是否良好，盖是否关紧。加热宜均匀，灭菌后减压不可过猛。压力表退回“O”处才可打开盖。

? 6)为监测灭菌教果，可采用留点温度计或嗜热脂肪芽胞菌生物指示菌片。 湿热灭菌与干热灭菌的比较 热力灭菌法 ：高温杀灭細菌

干热灭菌法

焚烧----最彻底的灭菌方法 烧灼----直接用火焰灭菌方法 干烤----加热160-180℃ 2小时 湿热灭菌法

加压蒸汽灭菌法：最有效的灭菌方法 121 ℃ 20~30分钟 煮沸消毒法：水煮100 ℃ 5分钟(繁殖体)~2小时(芽胞) 流通蒸汽消毒法：水蒸汽100 ℃ 15~30分钟(繁殖体) 间歇蒸汽灭菌法：反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌

巴氏消毒法：较低的温度（61 ℃ 30分钟）杀灭致病菌

同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好 原因

1、湿热中细菌菌体蛋白较易凝固 2、湿热的穿透力比干热大 3、湿热的蒸汽有潜热 ? 三、紫外线消毒 ? 杀菌原理与作用

? 紫外线可分为长波段、中波段和短波段3组。以短波段250．0～265.0nm的杀菌力最强。一般多以253．7nm作为紫外线杀菌波长的代表。

? 紫外线照射能量较低，不足以引起原子的电离，仅产生激发作用，使电子处于高能状态而不脱开。当微生物被照射，此作用可引起细胞内成分，特别是核酸、原浆蛋白与酶的化学变化，从而使之死亡。

? 各种微生物对紫外线的耐受力不同，真菌孢子对紫外线的耐受力最强，芽胞菌次之，细菌繁殖体最差。但也有例外，如橙黄八叠球菌的耐受力反比枯草杆菌芽胞高。

? 因紫外线是一种低能量的电磁辐射，故穿透力极差，空气中的湿度、尘粒对其均有影响；在液体中，亦随深度增加而降低。各种杂质(盐、有机物等)均可影响紫外线作用，它不能透过固体物质。普通玻璃中有氧化铁，可阻挡紫外线。因此，它无法透过2mm厚的窗玻璃。但能透过石英，糊窗纸可透过20～40％；聚氯乙烯薄膜，开始时可透过30%，但6 h后，由于薄脱变质，透过率可以降至3％以下。 ? 消毒应用 ? 1．空气消毒

? 紫外线的空气消毒，主要是利用局部空气先行照射消毒，然后随着空气的对流而使全室空气得到消毒。为获得最大的反射章，充分发挥紫外线的作用，紫外线灯上需装反光性强的铝制反光罩。

? (1)固定式照射：将紫外灯固定于天花板上，略高于人的头顶，向下照射；或固定于墙壁上，侧向照射。每分神照射产生的效果相当于换气1～3次。每换气1次约可清除原菌数的63．2%。因紫外线对人体有害，此类适于无人在的情况。

若消毒必须在室内有人情况下进行，则可用向上照射法，即将灯固定于天花板或墙壁上，离地2.5m左右，灯管下按装金属反光罩，使光线反射到天花扳上。一般为防止损害人的健康，每立方米的功率不超过IW。在10～15m2的房间按

装30w紫外线灯管1支。照射时，每次40～120min，间隔lh。用这样的方法，可减少空气中微生物50～70%，甚至达90％以上。

? (2)移动式照射：用4支30W紫外线灯管装于0.3m的铝制圆筒内，在一端装以28 m3／min流量的风扇即制成了移动式紫外线空气消毒设备。这种装置依靠风扇，使空气流经紫外线通道而将之消毒。可用于生活用房及缓冲间等消毒灭菌。在体积较小的房间，lh照射可相当于换气27次。 ?

? 2．对水的消毒

? 紫外线消毒清水，装置的设计应使灯管不浸于水中。常用的直流式消毒装置呈管道状，紫外线灯管固定于液面上l cm左右处。水由一端进人，一端流出，流过的水层不宜太厚，一般不超过2 cm。 ? 使用注意要点

? l灯管表面应经常用酒精棉球轻轻擦拭，除去表面的灰尘与污垢，以减少对紫外线穿透的影响。

? 2．紫外线内眼看不见，灯管放射出的蓝紫色光线并不代表紫外线强度。有条件的可用紫外线强度仪测定其强度，无条件者可逐月记录使用时间。紫外线灯的平均寿命(每3h开启1次)可达2500h以上。

? 3．消毒时，室内应保持清洁、干燥。空气中不应有灰尘或水雾，如空气中含尘粒800～900粒／m3，则降低灭菌效率20～30%；湿度45～65%，紫外线照射3h，空气中细菌减少80～90％，若相对湿度增到80～90％时，则降低灭菌效率30～40%，一般相对湿度不宜超过40～60%；。 ?

? 4不透紫外线的表面，只有直接照射才能达到消毒目的，因此要按时翻动，以及室内不能放置过多不必要的物品。

? 5紫外线对人体有一定的危害，直接照射(1m远)1～2min，可使皮肤产生红斑，对眼睛直射30s可产生刺激症状，剂量再增大引起紫外线眼炎。因此，应避免直接照射或眼睛直视。

? 6 温度对紫外线有一定影响，一般15～35℃，若室温一4℃～0，紫外线即失去作用。

? ７．紫外线的灭菌效能与投射角度也有关系，在等距离内，每相差30。，则照射强度下降很多。如90.直射强度为4．8mW／cm2；倾斜30.时强度减至2.7 mW／cm2；若再倾斜30。，则强度减少到0.56mW／cm2。 四 微波灭菌法

? 微波是指频率在30~3000MHz之间的电磁波。水可强烈地吸收微波，使其极性分子转动，分子间的磨擦而生热，且升温迅速，靠热力而灭菌。在数十秒至几分钟之内可达100～150℃，并全部杀死液体中的微生物，适于水溶性注射液的灭菌。另外，固体药材饮片及固体制剂（丸剂、散剂、胶囊粉等）也含少量水分，微波能穿透到固体内部，由表至里被均匀加热，而起干燥、灭菌的作用。多用于口服液体制剂的灭菌，有望用于注射液的灭菌。但可能对某些药品的PH值、含量、颜色有影响。 五、电消毒法

? 臭氧是以无声放电法产生的。在一对交流电极之间隔以介电体，当空气或氧气通过高压电极(6000～8000V)时，在具有足够动能的放电电子中，使氧分子电离，一 部分氧分子被聚合为臭氧。臭氧有很强的杀菌力，

高效、广谱。有的医用高分予器材厂采用臭氧发生器进行了净化车间的空气消毒，效果甚为满意。 ? 六、辐射消毒法 ? (一)概况

? 1957年，美国强生(Johnson)公司的一个分公司(Ethicon)首先应用辐照技术进行了手术缝合线的消毒。1958年。丹麦建立丁第一个钴60辐射消毒装置。由于采用该方法消毒灭菌比热力消毒、环氧乙烷法具更优越的地方，即灭菌彻底、不污染环境、无残留毒性、能耗低、更适用于热敏怕湿材料的灭菌等优点，因此，发展非常迅速。

? 目前，国际上一般采用25kGy作为灭菌剂量，只有丹麦、瑞典等北欧国家采取了40～45kOy。近几年来，随着GMP的实施，极大地降低了初始污染程度，故有些国家(如美国)许多产品采用了低于25kGy的剂量，日本选取剂量的范围为15～25kGy。我们在研究医疗用品辐射条件、制造工厂的卫生学管理和监测，经实验计算，25kGy是医疗用品灭菌的安全剂量。可以预言，随着生产条件的不断改善，生产过程的规范化以及提高生产人员的素质，一个低的灭菌剂量的选取是可能的。 ? 辐射消毒法使用评价

? 优点：(1)消毒效果可靠；(2)不引起温度升高，是一种“冷处理”灭菌；(3)节约能源； (4)不破坏包装，可长期保存；(5)穿透力强，适用于封装灭菌；(6)无残留毒性；(7)处理过程干燥，无消毒剂的沾污；(8)可连续灭菌；(9)无环境污染。

? 缺点：(1)一次性投资大；(2)必须有经过专门训练的技术人员管理。 第三节化学消毒灭菌法 ? 一、气体灭菌法

? 此法系指用化学思剂的气体或蒸汽对物品进行的灭菌。常用者为环氧乙烷、甲醛、过氧乙酸、丙二醇、乳酸、戊二醛等。 ? (一)环氧乙烷

? 在室温、常压下是无色气体，具醚样臭，可闻出的气味阈值为700ppm，沸点为10．8℃，当温度低于10.8℃时，气体液化呈无色透明液体，能溶于水。

? 环氧乙烷具较强的扩散和穿透能力，作用快，对细菌芽胞、真菌和病毒等各种微生物均有杀灭作用，属于广谱灭菌剂。 ? 1．灭菌机理

? 环氧乙烷属烷化剂，它能与微生物的蛋白质、DNA等发生非特异性的烷基化作用，对菌体细菌的代谢产生不可逆性破坏。 ? 2．应用范围

? 可用于对热敏感的塑料制品、橡胶制品、皮革制品、聚乙烯等包装的某些药品、工作衣．敷料等。 ? 3．注意事项

? (1)环氧乙烷具可燃可爆性，当与空气混合，空气含量达3%(V／V)时即可爆炸。故应用时需用情性气体如二氧化碳或氟利昂等稀释，如配成环氧乙烷10%，加二氧化碳90%；环氧乙烷10～12%，氟利昂88～90%等多种规格的混合气。

? (2)环氧乙烷对塑料、橡胶、纸板等穿透力强，亲和力也强。故灭菌

百度搜索“77cn”或“免费范文网”即可找到本站免费阅读全部范文。收藏本站方便下次阅读，免费范文网，提供经典小说综合文库微生物学讲义(4)在线全文阅读。