能使培养的微生物处于比较一致的生长发育阶段上的培养方法。 12、举例说明同步培养的方法?
机械法:微生物细胞在不同的生长阶段,其细胞体积、质量等特征存在差异,通过机械法就可使它们在一定程度上分开来。一般有三种方法:离心分离法,过滤分离法,硝酸纤维膜法。
环境条件控制技术:温度、培养基成分控制、其他方法(用最高稳定期的培养物接种、抑制DNA合成法、控制光照、分离芽孢等)
13、菌丝在营养丰富的培养基中生长情况如何?(分支多而频繁) 14、菌丝在营养贫乏的培养基中生长情况如何?( 分支少) 15、防腐:防止或抑制霉腐微生物在食品等物质上的生长 16、消毒:杀死或灭活病原微生物(营养体细胞) 17、灭菌:杀死包括芽孢在内的所有微生物
18、化学治疗:杀死或抑制宿主体内的病原微生物
19、最低抑制浓度:是测量抗菌药物的抗菌活性大小的一个指标,指在体外培养细菌18至24小时后能抑制培养基内病原菌生长的最低药物浓度。 20、抗代谢物的机理如何?在微生物生长过程中常常需要一些生长因子才能正常生长,那么可以利用生长因子的结构类似物干扰机体的正常代谢,以达到抑制微生物生长的目的。 21、抗药性产生的机理?1、细胞质质膜通透性改变2、药物作用靶改变3、合成了修饰抗生素的酶,使抗生素失去了抗菌活性4、抗性菌株发生遗传改变,发生变异的菌株导致合成新的多聚体,以取代或部分取代原来的多聚体。 22、 影响微生物生长的几大因素? 温度、PH、O2、水活度、营养物质
23、 嗜冷微生物:嗜冷微生物分为专性和兼性两类:
1.专性嗜冷菌适应在低于20℃以下的环境中生活,高于20℃即死亡。有一种专性嗜冷菌,在温度超过22℃时,其蛋白质的合成就会停止。专性嗜冷菌的细胞膜内含有大量的不饱和脂肪酸,而且会随温度的降低而增加,从而保证了膜在低温下的流动性,这样,细胞就能在低温下不断从外界环境中吸收营养物质。
2.兼性嗜冷菌可以在低温下生长,但也可以在20℃以上生长。
24、嗜热微生物:细菌是嗜热微生物中最耐热的,按照它们的耐热程度不同又可分为5个不同的类群:1、耐热微生物能在温度在45~55℃,低于30℃也能生长。
2、兼性嗜热菌的最高生长温度在50℃~65℃,也能在低于30℃条件下生长。
3、专性嗜热菌最适温度在65℃~70℃,不能在低于40℃~42摄氏度条件下生长。
4、极端嗜热菌最高生长温度高于70℃,最适温度高于65℃,最低生长温度高于40℃。
5、超嗜热菌的最适生长温度80℃~110℃或121℃,最低生长温度在55℃左右。 25、微生物耐低温的机理如何?细胞膜中含有大量的不饱和脂肪酸,以维持低温条件下膜的流动性;具有在低温条件下仍具有功能的酶,尽管活性相对较低;
26、微生物耐高温的机理如何?通常,高温微生物的DNA中具有高G+C含量;嗜高温细菌的细胞膜中含有大量的饱和脂肪酸,使得其细胞膜在高温时仍能保持结构稳定,并发挥正常功能;极端嗜高温微生物,实际为古生菌,其细胞膜并非由脂肪酸组成,而是由若干重复的C5亚单位组成的复合物,即植烷,一种分支的饱和异戊间二烯化合物,可赋予细菌生存
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于超高温环境的能力;高温及超高温微生物的结构蛋白,如核糖体蛋白,转运蛋白,及所含酶系均高度稳定;其蛋白质通过多种途径进行了修饰,如脱水作用,一级结构的变化,以负责保持结构的稳定。
27、根据微生物与氧气的关系,可以分为哪五大类?
严格好养菌、兼性厌氧菌、严格厌氧菌、耐氧菌、微好氧菌
第八章 微生物的遗传
1、遗传:性状由亲代向子代传递的现象
变异:亲代与子代间或群体内不同个体间基因型或表型的差异。 2、感受态:即能从周围环境吸取DNA的一种生理状态
3、原生质融合:原始质体融合技术是将遗传不同的两种菌(包括中间、种内及属间)融合为一个新细胞的技术。主要包括原始质体的制备、原生质体的融合、原始质体再生和融合子选择等步骤。
4、准性生殖:不经过减数分裂而导致基因重组的一种生殖方式
5、准性生殖的四个过程:菌丝联结,异核体形成,核配,体细胞交换,和单倍体化 6、如何证明微生物的抗性突变和抗生素本身无关? 7、为什么用u.v诱导E.coli K12( λ/λdgal+)双重溶源化细胞所获得的细胞裂解液对E.coli(gal-)可进行高频转导?
用UV诱导E.coliK12双重溶源化细胞所获得的细胞,λ和λdgal+会从宿主染色体上游离下来,经互补作用,λ和λdgal+同时快速复制,细胞裂解液中λ和λdgal+两种噬菌体的数量水平相当等,如此大量λdgal+可对E.coil(gal-)可进行高频转导。
8、紫外线对DNA损伤后有几种修复作用:光复活作用,切除修复作用,重组修复,SOS修复
9、如何用肺炎链球菌证明遗传物质是 DNA?利用肺炎双球菌转化实验:
S cell extract + DNase + R cells → R colonies
10、如何用T2噬菌体证明遗传物质是DNA?
35S标记的T2噬菌体感染大肠杆菌,可检测放射性主要存在于胞外;32P标记的T2噬菌体感染大肠杆菌,放射性主要存在于胞内。 11、如何用烟草花叶病毒证明遗传物质是DNA?
步骤:1、用表面活性剂处理标准TMV,得到它的蛋白质。
2、从TMV的变种HR(外壳蛋白的氨基酸组成与标准株在2~3个氨基酸的差别)通过弱碱处理得到它的RNA。
3、通过重建获得杂种病毒
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4、标准TMV抗血清使杂种病毒失活,HR抗血清不使它失活,证实杂种病毒的蛋白质外壳是来自TMV标准株。
5、杂种病毒感染烟草产生HR所持有的病斑,说明杂种病毒的感染特性是由HR的RNA所决定,而不是二者融合的特征。
6、从病斑中一再分离的到的子病毒的蛋白质外壳是HR蛋白质,而不是标准的蛋白质外壳。
12、什么是中心法则?
克里克(F. Crick )于1958年提出的阐明遗传信息传递方向的法则,指遗传信息从DNA传递至RNA,再传递至多肽。DNA同RNA之间遗传信息的传递是双向的,而遗传信息只是单向地从核酸流向蛋白质。 13、基因:
遗传信息的基本单位。一般指位于染色体上编码一个特定功能产物(如蛋白质或RNA分子等)的一段核苷酸序列。 14、乳糖操纵子:(第九章)
大肠杆菌中控制β半乳糖苷酶诱导合成的操纵子。包括调控元件P(启动子)和O(操纵基因),以及结构基因lacZ(编码半乳糖苷酶)、lacY(编码通透酶)和lacA(编码硫代半乳糖苷转乙酰基酶)。在没有诱导物时,调节基因lacI 编码阻遏蛋白,与操纵基因O 结合后抑制结构基因转录;乳糖的存在可与lac阻遏蛋白结合诱导结构基因转录,以代谢乳糖。 15、细菌结构基因的特点:
1、闭合环状、超螺旋 2、与其它碱性 3、无内含子 4、形成操纵子 5、无或少重复学列
16、细菌有几种变异现象?转移、重组、突变
17、细菌的遗传物质以什么形式存在?染色体、质粒、噬菌体、转座子。 18、什么是质粒?有何特点?
质粒:细菌细胞内能在染色体外独立复制的遗传因子。
特点:小的双链DNA分子,通常环状,独立于染色体而存在,复制不依赖于宿主染色体,无细胞外存在形式,在细胞内仅有核酸形式,决定细菌的某些生物学性状,可自行丢失或消除,可转移,相容性。
19、质粒的种类有哪些?致育因子,抗性因子,Col质粒,毒性质粒,代谢质粒、隐秘质粒。 20、突变:一个基因内部遗传结构或DNA序列的任何改变,包括一对或少数几对的碱基1缺失、插入或置换,而导致的遗传变化称为基因,其发生变化的范围很小,所以又称点突变或狭义的突变。广义的突变又称为染色体畸变,包括大段染色体的缺失、重复、倒位。 21、基因的突变类型
碱基对置换,转换,颠换,移码突变,染色体畸变。
22、如何用影印培养证明某种性状的突变与某种物质的存在无关?
23、 自发突变的原因是什么?
在未额外添加理化因子的情况下发生。可能源于DNA复制或转座过程。自发突变率很低, 24、什么是诱发突变? 许多化学、物理和生物因子能够提高其突变频率,将这些能使突变率提高到自发突变水平以上的物理、化学和生物因子成为诱变剂
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25、诱发突变的方法有哪些?
用碱基类似物、插入染料、直接与DNA碱基起化学反应的诱变剂、辐射和热、生物诱变因子
26、 5-溴尿嘧啶的突变机理?酮式和A结合,烯醇式与G结合,最终导致A:T→ G:C和 G:C→ A:T的突变。
27、Ames实验时,有时为什么会在实验物周围没有突变子,而在离药物较远的地方有很多回复突变子?
回复突变:是指突变题失去失去的野生型性状,可以通过第二次突变得到恢复,这种第二次突变称为回复突变。
28、分解烃类的超级细菌是如何构建的?将降解芳烃,萜烃和多环芳烃的质粒转移到能讲解脂烃的假单胞菌体内。
29、克隆:来自同一个祖先、经过无性繁殖所产生相同的分子(DNA、RNA)、细胞的群体或遗传学上相同生物个体。
30、基因重组:造成基因型变化的核酸的交换过程。包括发生在生物体内(如减数分裂中异源双链的核酸交换)和在体外环境中用人工手段使不同来源DNA重新组合的过程。
31、转化:指同源或异源的游离DNA分子(质粒和染色体DNA)被自然或人工感受态细胞摄取,并得到表达的水平方向的基因转移过程。
32、结合作用:指通过细胞与细胞的直接接触而产生的遗传信息的转移和重组的过程。 33、用什么实验证明转导:用细菌的多重营养缺陷型(避免回复突变的干扰),进行的杂交实验得到证实的。两株多重营养缺陷型菌株只能在混合培养基混合培养后才能再基本培养基上长出原养型菌落,而未混合的两亲菌均不能在基本培养基上生长,说明长出的原养型菌落是两菌株之间发生了遗传交换和重组所致。
34、转导:由病毒介导的细胞间进行遗传交换的一种方式,其具体含义是指一个细胞的DNA和RNA通过病毒载体的感染转移到另一个细胞中。 35、Hfr × F- 和F+× F- 杂交得到的接合子都有性菌毛产生吗?它们是否都能被M13噬菌体感染呢?
不是,Hfr×F- 的受体细胞任然是F-,而F+×F-的供体和受体细胞都有菌毛。有菌毛的细胞就可以被M13噬菌体感染。
M13噬菌体:一种丝状噬菌体,可感染含F因子的大肠杆菌细胞。 36、基因工程的基本过程: 1、基因的分离
2、外源基因与载体DNA的体外重组 3、重组DNA导入宿主细胞 4、目的克隆的筛选与鉴定 5、控制外源基因的表达 37、PCR技术:
它是一种体外快速扩增特定DNA序列的新技术
进行PCR需合成一对寡核苷酸作为引物,然后进过变性、退货、延伸,扩增DNA
第九章 微生物生态
1、为什么土壤中存在大量的微生物?
土壤是固体无机物、有机物、水、空气和生物组成的过孔性复合物。溶解在土壤水中的
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有机和无机组分可悲微生物利用,土壤是微生物的合适生境。 2、研究不可培养的微生物有什么意义?
1、活的不可培养的微生物可以逃过检测,成为疾病的潜在源头
2、不可培养状态细胞可能逃过抗生素的作用,而错过疾病的最佳治疗阶段。 3、活着的不可培养微生物有几种存在状态?
4、微生物在生态系统中的功能如何? 1、是有机物的主要分解者 2、是物质循环中的重要成员 3、生态系统中的初级生产者 4、是物质和能量的
5、微生物在碳素循环中有什么作用? 生境中碳循环是生物圈总循环的基础。异养的宏体生物和微生物都参与循环,但微生物的作用较重要,而且是唯一能在厌氧条件下进行有机物分解的生物。 6、微生物在氮素循环中有什么作用?
氮循环由6种氮化合物的转化反应所组成,包括:固氮作用、铵同化、氨化(脱氨)作用、硝化作用、硝酸盐还原与反硝化作用
7、如何设计实验从环境中分离到厌氧降解苯酚的微生物? 8、名词解释:
1、中性关系 neutralism:两种群之间在一起彼此没有影响或仅存无关紧要的影响。 2、互惠(共生)关系 mutualism:相互作用的两个种群相互有利,两者之间是一种专性的和紧密的结合,是协同作用的进一步延伸。联合的种群发展成一个共生体,有利于它们去占据限制单个种群存在的生境。地衣是互惠共生的典型例子。
3、偏利关系 commensalisms:一种种群因另一种种群的存在或生命活动而得利,而后者没有从前者受益或受害。
4、协同关系 synergism:相互作用的两种种群相互有利,二者之间是一种非专性的松散联合。例子 氨转化成硝酸的过程
5、竞争关系 competition:两个种群因需要相同的生长基质或其它环境因子,致使增长率和种群密度受到限制时发生的相互作用,其结果对两种种群都是不利的。
6、拮抗关系 antagonism:一种种群阻碍另一种种群的生长,而对第一种种群无影响。 7、寄生关系 parasitism:一种种群对另一种群的直接侵人,寄生者从寄主生活细胞或生活组织获得营养,而对寄主产生不利影响。
8、捕食关系 predation:一种种群被另一种种群完全吞食,捕食者种群从被食。 9、固氮作用
分子态氮被还原成氨和其他氮化物的过程称为固氮作用。 10、氨化作用
微生物分解有机氮化物产生氨的过程称为氨化作用。 11、硝化作用
微生物将NH3氧化成硝酸盐的过程称为硝化作用 12、反硝化作用
微生物还原硝酸盐,释放出分子态氮和NO的过程称为反硝化作用,参与这一作用的细菌称为反硝化作用细菌。
13、土著菌群 节细菌属和诺卡氏菌属不受土壤中动植物残体数量的影响,相对稳定地存在于土壤中而被称为土著菌群。
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