糖化血红蛋白(3)

应的治疗方案, 特别适合于临床科室使用, 尤其对于小儿患者而言更有优势。其检测结果也完全达到并超过临床要求, CV值在5%以内。

优点: 操作简单、快速、价廉, 特异性强, 不受异常血红蛋白的干扰, 对经翻译以后修饰的血红蛋白和病理血红蛋白的影响相对不敏感, 对血标本储存的时间也不象离子交换法那样严格。缺点: 检测结果为糖化血红蛋白总量, 不能测试GH b的单一组份,且包含H bA1的糖化组份, 因此将亲和色谱所测出的GH b 称为总的GHb是不确切的, 严格来说是占不同百分数的各种GH b, 目前对其测定内容的命名国内外尚不统一, 目前日本化学工业株式会社所生产试剂盒称为糖化一亲和色谱GHb, 以便与其他方法所测H bA, 或H bAc相区别。但并不影响它作为可靠的糖代谢指标的价值。大量实验还证明, 该法所测GH b 值与H PLC 等法所测H bA, H bA c及空腹、餐后2 h血糖均呈高度相关, 表明该法对糖尿病患者是一种较理想的病情监测指标。

6. 离子捕获法 近发展起来的新方法, 代表仪器有Abbo tt的IMX, 其原理是糖化血红蛋白与相应抗体结合后, 联以荧光标记物, 形成一反应复合物, 再联结带负电荷的多聚阴离子复合物, 而在IMX 反应孔中的玻璃纤维预先包被了高分子的四胺合物, 使纤维表面带正电, 使前述的反应复合物吸附在纤维表面, 经过一系列清洗后测定其荧光强度, 从而得到糖化血红蛋白的浓度, 该方法适用于成批糖化血红蛋自标本的检测。

7. 免疫凝集法 糖化血红蛋白与相应的单抗结合进而发生凝集反应, 通过测定吸光度来表示凝集量, 可用于全自动生化分析仪上进行测定。以免疫分析为基础的仪器( DCA2000) 在最近几年中得到推广, 约在7 m in 内就能读取数据, 要求对样品成批试验, 每次试验均应使用一个新试剂盒, 操作前应注意混匀试剂。免疫比浊法重复性较好, 但易受脂肪血、黄疸等样本因素影响, 抗交叉污染较差, 而且要求血红蛋白在一定范围之间才能达到较好的线性。

8. 金标免疫渗滤法(金标法) 免疫渗滤法, 操作较简便, 目前代表仪器有挪威NycoCardReaderII特种蛋白多功能全定量金标检测仪。

9. 化学发光法 采用离子捕捉免疫分析法, 应用抗原抗体反应原理, 联以荧光标记物, 通过连接带负电的多阴离子复合物, 吸附到带正电的纤维表面, 经过一系列彻底清洗等步骤后, 测定荧光强度变化率, 计算浓度。采用专用试剂包和免疫发光分析仪,其检测系统易于规范和重复, 可减少操作技术误差, 检测的灵敏度和特异性高, 批内、批间变异系数小, 回收率高, 准确度高, 交叉污染率小, 影响因素少。

10. 放射免疫法 优点: 精密度高、特异性强、快速、价格相对便宜, 可批量测试, 且不受各种干扰因素的影响。缺点: 目前对制备高效价的抗体尚存在许多困难, 仍处于研究中, 未能形成商品化试剂盒。

11. 酶法 原理为用特殊蛋白酶分解Hb, 3~ 5 m in内果糖基氨基酸从H b分离, 果糖基氨基酸氧化酶( FAOD )从果糖基氨基酸产生H2O2, H 2O2经POD与DA- 64反应, 选择751 nm 测吸光度改变求得GH b浓度 6操作过程 编辑

血样

1、操作方法 （1）收集静脉血、加入EDTA抗凝。（2）根据样品数取试管若干，分别吸取400μl溶血剂加入各试管中。（3）分别吸取80μl标准或样本放入上述各试管中，混合均匀。（4）放置5～10min，则制成了血红蛋白样本A3。

2、糖化血红蛋白的制备及测定 （1）根据样品的数量，取干净的试管若干，分别吸取3.0ml阳离子树脂，放入各管中。（2）向上述试管中分别加入已预备的100μl血红蛋白样本（A3）。将层析柱插入试管中，使得橡皮塞高于液面至少1cm。（3）充分摇荡试管混合5～10min（最好使用涡旋摇荡器，如果没有则需剧烈摇荡20min。（4）然后慢慢推动层析柱进入试管，直到糖化血红蛋白提取完全。（5）上清液倒入另一支试管或直接倒入比色杯进行比色。（6）以蒸馏水作空白在415nm调零。（7）读取并记录标准，样品吸光度值。

3、总血红蛋白测定 （1）根据样品数量取试管若干，分别加入5.0ml蒸馏水。（2）加入20μl血红蛋白样本（A3）。混合均匀。（3）以蒸馏水作空白在415nm调零。（4）读取并记录各管吸光度值。

计算：糖化血红蛋白吸光度 总血红蛋白吸光度×10=糖化血红蛋白%（正常值范围6.0%～8%）。 7监测意义 编辑

糖化血红蛋白的特点决定了它在糖尿病监测中有很大的意义：（1）与血糖值相平行。血糖越高，糖化血红蛋白就越高，所以能反映血糖控制水平。（2）生成缓慢。由于血糖是不断波动的，每次抽血只能反映当时的血糖水平，而糖化血红蛋白则是逐渐生成的，短暂的血糖升高不会引起糖化血红蛋白的升高；反过来，短暂的血糖降低也不会造成糖化血红蛋白的下降。由于吃饭不影响其测定，故可以在餐后进行测定。（3）一旦生成就

不易分解。糖化血红蛋白相当稳定，不易分解，所以它虽然不能反映短期内的血糖波动，却能很好地反映较长时间的血糖控制程度，糖化血红蛋白能反映采血前2个月之内的平均血糖水平。（4）较少受血红蛋白水平的影响。糖化血红蛋白是指其在总血红蛋白中的比例，所以不受血红蛋白水平的影响。 8控制标准 编辑

糖化血红蛋白能够反映过去2～3个

月血糖控制的平均水平，它不受偶尔一次血糖升高或降低的影响，因此对糖化血红蛋白进行测定，可以比较全面地了解过去一段时间的血糖控制水平。世界权威机构对于糖化血红蛋白有着明确的控制指标，ADA（美国糖尿病学会）建议糖化血红蛋白控制在小于7%，IDF（国际糖尿病联盟）建议糖化血红蛋白控制标准为小于6.5%，目前我国将糖尿病患者糖化血红蛋白的控制标准定为6.5%以下。

糖化血红蛋白与血糖的控制情况 4%～6%：血糖控制正常。 6%～7%：血糖控制比较理想。 7%～8%：血糖控制一般。

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