Car-T细胞培养标准操作流程

实验室sop

Car-T细胞培养标准操作流程

1 目的：保证Car-T细胞制备和培养符合要求。

2 范围：适用于符合实验的要求患者外周血制备和培养

3 责任人：实验员人、临床相关人员。

4 内容

4.1耗材：50ml离心管，10ml移液管，5ml移液管，75cm2培养瓶，150 cm2培养瓶，EP管，1.8ml冻存管

4.2试剂：X-VIVO 15TM，PBS缓冲液，75%医用酒精，人淋巴细胞分离液，CD3/CD28免疫磁珠，IL-2，注射用人血白蛋白。

4.3环境：

4.3.1外周血分离，培养应在恒温恒湿的万级层流室内进行，开放操作必须在百级生物安全柜内进行。

4.3.2实验人员应提前对净化室和生物安全柜进行杀菌消毒，紫外线照射时间 不少于30min，消毒消毒后，净化空调开启时间不少于30min，生物安全柜运行稳定后方可操作。

4.4操作：

4.4.1采集接收外周血

4.4.1.1患者符合治疗方案，各项检测符合要求，采集患者外周血60-80ml。

4.4.1.2接收外周血并填写《外周血采集交接记录》，核对外周血患者相关信息，及相应检测报告，报告由医院提供，至少包括：HBsAg，HCVAb，HIVAb，Anti-TP，ALT。

4.4.2操作前准备

4.4.2.1净化室，生物安全柜消毒完毕后，开启净化空调运行30min，生物安 全柜运行稳定。

4.4.2.2从试剂间冰箱中取出细胞培养基，恢复室温。

4.4.2.3生物安全柜表面75%酒精消毒，外周血袋表面酒精消毒转入安全柜内。

4.4.3 分离单个核细胞（PBMC）：

4.4.3.1使用灭菌消毒的剪刀剪断血袋塑料管或者使用一次性注射器，把血袋

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