112、增强子:指能使基因转录频率明显增加的DNA远端调控序列。
2、 病毒基因组的结构特点
答:a与细菌相比,病毒基因组很小,大小相差较大。
b病毒基因组由DNA组成,也可以由RNA组成,每种病毒颗粒中只含有一种核酸,核酸结构可以是单链或双链、环状或线状。 c有重叠基因。
d大部分是用来编码蛋白质的,基因间的间隔序列较短。 e功能上相关的基因集中成簇,在基因组的特定的部位,形成一个功能单位或转录单元,转录产物为多顺反子,之后经过简单加工。
f噬菌体的基因是连续的;而真核细胞病毒的基因是不连续的,具有内含子。
3、 细菌染色体基因组结构的一般特点
答:☆ 细菌的染色体基因组通常仅由一条环状双链DNA分子组成,染色 体相对聚 集在一起,形成一个较为致密的区域,称为类核。
☆ 只有一个复制起点,数个相关的结构基因串联在一起,受同一调控区调节,合 成多顺反子mRNA。
☆ 具有操纵子结构。
☆ 编码蛋白质的基因都是单拷贝,但rRNA基因是多拷贝。
☆ 和病毒的基因组相似,非编码的DNA部份所占比例比真核细胞基因组少得多。 ☆ 基因组DNA中具有多种调控区如复制起始区、复制终止区、转录启动区和终 止区等,还有重复序列,比病毒基因组复杂。 ☆ 具可移动的 DNA序列
4、 真核生物基因组的特点
答:☆ 真核生物的基因组比较庞大,具有多个复制起始点。
☆ 一个基因组包括多条线状染色体,每条染色体DNA上有多个复制起始点。 ☆ 真核生物的基因组DNA与蛋白质结合形成染色质的复杂高级结构,储存于细 胞核内。 ☆ 真核细胞被核膜分隔成细胞核和细胞质,在基因表达中,转录和翻译在时间和 空间上被分隔,不偶联。
☆ 真核生物基因组存在着许多重复序列,重复序列单位长度不一,重复程度各异。 ☆ 真核生物的蛋白质基因一般以少拷贝形式存在,转录产物为单顺反子。 ☆ 存在着可移动的DNA序列。
☆ 大多数真核生物基因含内含子,为断裂基因。
5、滚环复制特点: (1)共价延伸;
(2)模板链和新合成的链分开;
(3)不需RNA引物,在正链3‘-OH上延 (4)只有一个复制叉; (5)形成多联体;
12、DNA的复制过程 1、复制的起始
?DNA解旋、解链,形成复制叉:拓扑异构酶、解旋酶及单链DNA结合蛋白 ?RNA引物合成:依赖于单链模版,由引物酶催化合成一小段RNA引物
?特点:原核环形DNA通常只有一个起点,双向复制;真核线性DNA通常多个起始点,形成多个复制叉 2、复制的延长
?a子链延长:引物合成后,由polII催化,在引物3’-OH末端逐一添加与模板链对应互补的脱氧核苷三磷酸 ?b半不连续合成:
A.领头链:键的延长方向与解链方向相同,为连续合成
B..随从链:键的延长方向与解链方向相反,为不连续合成,产生冈崎片段 3、复制的终止 ?水解引物及填补空隙:冈崎片段合成后,由Pol I水解去除RNA引物,并填补留下的空隙 ?连接酶连接冈崎片段形成完整双链DNA分子:空隙填补后,DNA片段与片段之间的一个缺口由DNA连接酶催化连接,从而产生完整的双链DNA分子
21、帽子结构的功能
(1) 对翻译起识别作用------为核糖体识别RNA提供信号,Cap0 的全部都是识别的重要信号, Cap1,2 的甲基化能增进识别
(2) 增加mRNA 的稳定性,使5’端免遭外切核酸酶的攻击 (3) 有助于mRNA越过核膜,进入胞质
22、poly(A) 的功能 (1) 可能与核质转运有关 (2) 增强mRNA稳定性 (3) 增强可翻译能力
24、翻译(蛋白质的生物合成): 以氨基酸为原料 以mRNA为模板 以tRNA为运载工具 以核糖体为合成场所
起始、延长、终止各阶段蛋白因子参与 合成后加工成为有活性蛋白质
27、肽链合成延长 包括以下三步:
进位:新氨酰tRNA识别核糖体内的mRNA,进入A位 转肽:P位的氨基酸转到A位新氨基酸末端,形成肽键 移位:核糖体向3’端移动1个密码子长度 肽链延长是以上3步在核糖体上连续性循环式进行,每次循环增加一个氨基酸,又称为核糖体循环(ribosomal cycle)。
31、基因工程的操作流程 1、分:分离目的基因
2、切:对目的基因和载体适当切割 3、接:目的基因与载体连接 4、转:重组DNA转入受体细胞
5、筛:筛选出含有重组体的受体细胞
6、表:目的基因在受体细胞中表达,受体细胞成长为基因改造生物
32、PCR技术的原理
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)原理类似于DNA的变性和复制过程,即在高温(93 ~ 95℃)下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~65℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链;在Taq酶的最适温度(72℃)下,以引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5’→3’方向延伸,合成DNA新链。这样,每一双链的DNA模板,经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行,每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板,每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍,PCR产物得以2n的批数形式迅速扩增,经过25~30个循环后,理论上可使基因扩增109倍以上,实际上一般可达106~107倍。 1.变性:在加热或碱性条件下可使DNA双螺旋的氢键断裂,形成单链DNA,称之为变性。 2.退火:是模板与引物的复性。引物是与模板某区序列互补的一小段DNA片段。 3.延伸:从结合在特定DNA模板上的引物为出发点,将四种脱氧核苷酸以碱基配对形式按5’→3’的方向沿着模板顺序合成新的DNA链。
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